悬浮芯片集成检测技术在急性冠脉综合征早期预警中的应用

论文摘要

急性冠脉综合征（ACS）是由于动脉粥样斑块不稳定,斑块出现溃疡、破裂,最后导致血栓的形成而引起的一组严重的急性缺血性心脏病,包括不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris,UAP）、非ST段抬高心肌梗死（non-ST elevation infarction,NSTEMI）和ST段抬高心肌梗死（ST elevation infarction,STEMI）和心源性猝死,相对于稳定心绞痛患者比较而言,其临床特点是病情发生发展快,往往缺少心要的保护措失,死亡率高,预后及转归难以预料,严重危害了人们的健康。所以对其做出早期诊断并进行相应的干预,意义非常重大。实施冠状动脉造影检查可以比较直观的了解冠状动脉病变的程度和范围,但作为一种有创性检查,它有着有一定的风险,且花费较大,不能作为诊断的常规检查。因此有必要寻找一种简单快捷的诊断方法。ACS是由多种致病因素作用于不同环节所致的多病因疾病,公认的致病危险包括吸烟、肥胖、高血压等,但这些因素仍不能完全解释冠心病的成因及其严重程度。近年来一些新的冠心病危险因素逐渐受到人们的关注,目前证据表明炎症反应是动脉粥样硬化形成和发展过程中的相关因素之一,研究也证实动脉粥样硬化斑块中存在持续的炎症反应,急性炎症反应导致的冠脉粥样硬化斑块不稳定性是ACS发生的重要病理机制之一,而且与冠心病的严重程度和预后相关。因此炎性因子可能作为一类标记物,可以预测冠脉病变潜在的危险程度。易损斑块的研究是当今ACS研究的热点,主要是指不稳定和有血栓形成倾向的斑块,包括破裂斑块、侵蚀性斑块和部分钙化性结节病变。炎症反应是导致冠脉内结构性易损斑块向功能性易损斑块进展的重要环节。悬浮芯片检测技术是新兴的蛋白质芯片技术,该方法得利于光电转换及数字信号处理技术的进步。悬浮是反应的载体,利用悬浮在溶液中反应,克服了片膜芯片在大分子检测时受表面张力、空间效应等对反应动力学的影响以及在探针点样时容易发生点样错误、耗时、平行等量加样困难、加样头反复加样易发生样本间污染、重复性差等缺点。同时利用激光检测技术,识别编码悬浮及生物学反应后的荧光信号,具有高通量操作简便、重复性好、灵敏度高和动态范围宽等特点。目前已广泛用于于组织配型、遗传疾病的诊断、癌基因检测、外源性病原体的检测、SNP和mRNA／cDNA表达的检测等领域。目的检测急性冠脉综合征（ACS）患者血中超敏C-反应蛋白（hs-CRP）.脂蛋白a（Lp a）及脂联素（APN）3种蛋白因子的浓度并探讨其临床意义。对象与方法1、对象入选珠江医院心内科2008年3月至2008年12月诊断为急性冠脉综合征的患者96例（其中急性心梗患者64例,不稳定心绞痛患者32例）,男性60例,女性36例,平均年龄（63.11±10.84）岁。对照组选取按2000年美国心脏病学会（ACC）及美国心脏病协会（AHA）的诊断和命名标准诊断为稳定型心绞痛患者30例为对照,男性18例,女性12例,平均年龄（59.86±10.54）岁；另设正常对照组（NC）40例,为同期门诊的健康体检者,男性17例,女性23例,平均年龄（62.02±10.11）岁经64排CT或冠脉造影检查证实无有意义的狭窄血管。所有对象均取外周血5ml并分离出血清,-80℃冰箱冻存。2、方法2.1所有入选ACS组患者在无禁忌症的情况下进行标准的冠心病二级预防,均接受急诊或择期冠状动脉造影,并行适宜的血运重建。术后一般给阿司匹林、氯吡格雷、肝素三联抗血小板抗凝或加用替罗非班四联治疗。2.2严格登记入选病例一般资料：年龄、性别、体重、吸烟以及其他危险因素、疾病危险分层和一般实验室检查结果。2.3入选ACS组患者近期心血管事件的随访,如性心律失常、心功能不全、脑卒中、再梗/再发心绞痛、心源性死亡等。2.4建立定量多重检测包括hs-CRP、Lp（a）和APN在内的三种重要冠心病相关蛋白因子的悬浮芯片集成检测方法。2.5利用建立的悬浮芯片集成检测方法检测入选病例血清标本中hs-CRP、Lp（a）和APN等的含量,并与ELISA法的检测结果进行对比。2.6比较不同组的hs-CRP、Lp（a）和APN等三种蛋白因子水平的差异.2.7比较hs-CRP、Lp（a）和APN在急性冠脉综合征患者不同预后组之间的差异,比与其预后做相关分析。3、统计学处理应用SPSS 13.0的统计软件包进行数据统计,正态分布计量数据以X±s表示；非正态计量资料以中位数表示；计数资料以频数表示,计数资料组间差异采用χ2检验。正态分布计量资料差异经方差齐性检验后以one-way ANOVA法比较,组间多重比较采用LSD法。偏态分布或方差不齐的计量资料采用非参数检验,组间差异比较采用Krushal-WallisH检验,组间多重比较采用Neminyi Test。偏态资料双变量相关性采用Spearman相关分析。多因素预测急性冠脉综合征患者预后采用logistic回归分析,P≤0.05认为差异有统计学意义。结果1、不同组间一般资料比较差异均无统计学意义。2、悬浮芯片与ELISA两种方法检测结果有良好的相关性（hs-CRP:Spearman相关系数rs=0.934,P<0.001；Lp（a）：rs=0.909,P<0.001；APN：rs=0.843,P<0.001）。3、ACS组血清hs-CRP及Lp（a）浓度明显高于SAP组及NC组（P均<0.05）,APN浓度明显低于SAP组及NC组（P均<0.05）,其中AMI亚组预后不良患者CRP及Lp（a）浓度均大于UAP组预后较好患者,APN浓度明显低于UAP组预后较好患者（P均<0.001）。4、SAP组与NC组相比,hs-CRP, Lp（α）水平均高于NC组（P均<0.05）,APN浓度则于NC组无显著差异性（P>0.05）5、AMI及UAP短期内及远期预后不良的患者血清CRP及Lp（a）浓度均高于单纯AMI及UAP组,APN则分别低于单纯AMI及UAP组,差异具有显著性（P均<0.05）。6、3种蛋白因子与急性冠脉综合征近期预后的回归分析：回归方程为y=-10.307+1.556x1+0.234x2+0.003x3-0.292x4,方程判对率为96.9% hs-CRP,偏回归系数0.234,标准回归系数0.09,P<0.01,OR值1.264；LP（a）,偏回归系数0.003,标准回归系数0.001,P<0.05,OR值1.003；APN,偏回归系数-0.292,标准回归系数0.122,P<0.05,OR值0.746),3种蛋白因子与急性冠脉综合征近期及远期预后的回归分析,回归方程为y=-0.47+0.087x1-0.068x2,方程判对率为75.0%。（hs-CRP,偏回归系数0.087,标准回归系数0.026,P<0.01,OR值1.091；APN,偏回归系数-0.068,标准回归系数0.029,P<0.01,OR值0.934）。结论1、各组研究对象年龄、性别、体重等一般情况无显著差异性。2、建立了可同时检测包括hs-CRP、Lp（a）和APN在内的三种冠心病相关蛋白因子的悬浮芯片定量检测方法。3、成功将悬浮芯片技术用于急性冠脉综合征相关蛋白因子的检测,并证明了悬浮芯片多因子定量检测方法的可行性。4、利用悬浮芯片集成检测急性冠脉综合征相关蛋白因子有利于急性冠脉综合征早期诊断,并且结果更准确、快速、简便,为多功能、多指标、高通量、标准化的要求奠定了基础。5、hs-CRP、Lp（a）是急性炎症的重要标志物,是急性冠脉综合征的独立危险因素,参于了动脉粥样斑块内炎性活动,且在ACS预后不良组两者水平均明显高于预后较好者,因此可作为发生ACS危险及其预后的重要预报因子。APN水平则明显低于正常对照组及稳定型心绞痛组,且在ACS预后不良组水平明显低于预后较好者,提示其可能对冠脉炎症有保护作用。6、多因素logistic回归分析显示,hs-CRP、Lp（a）是急性冠脉综合征近期预后不良的危险因素,提示其与斑块介入治疗后病变新进展有关,而APN则为保护因素。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 不足之处
• REFERENCES
• 附录
• 攻读学位期间成果
• 致谢
• 统计证明