卫氏并殖吸虫CO Ⅰ和ITS2的克隆及在虫种鉴定中作用

论文摘要

目的:通过克隆卫氏并殖吸虫线粒体环氧化酶亚单位Ⅰ基因(COⅠ)和核糖体基因第二间隔区(ITS2)来观察上述两个基因在并殖吸虫的种别鉴定中的作用。方法:饱和酚法提取卫氏并殖吸虫、斯氏并殖吸虫、三平正并殖吸虫、血吸虫和兔基因组。利用引物PC 和PI 分别体外扩增获得卫氏并殖吸虫目的基因后凝胶电泳鉴定并且胶回收纯化上述两个基因片段。利用TA 克隆将目的基因和载体连接,转入TOPO10F’细胞,蓝白筛选克隆。挑取阳性克隆,小抽提取质粒行PCR 和酶切鉴定,阳性克隆送测序。将酶切后的COⅠ基因和ITS2 基因回收,地高辛标记成探针,尼龙膜上行斑点杂交观察实验结果。测序结果DNAMAN 分析。结果:克隆产物测序结果经DNAMAN 分析后发现本课题所使用的卫氏并殖吸虫福建株和卫氏并殖吸虫台湾株、韩国Haenam 株、日本Hyogo 株有较大的同源性,属于遗传距离彼此较近的东北亚组。COⅠ基因和ITS2 基因随机引物法地高辛标记探针和尼龙膜上点样的已知基因组行斑点杂交反应,发现COⅠ探针只能和卫氏并殖吸虫基因组特异结合而发生显色反应。有比较好的特异性和敏感性。而ITS2探针除了和卫氏并殖吸虫基因组结合外,还可以和兔基因组结合。结论:本课题所建立的卫氏并殖吸虫的COⅠ和ITS2 基因克隆可以作为种系进化分析。根据COⅠ和ITS2 基因序列分析证明本课题所使用的卫氏并殖吸虫属于遗传距离彼此较近的东北亚组。尼龙膜斑点杂交结果显示卫氏并殖吸虫的COⅠ基因片段可以初步作为种群鉴定的后备探针。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、英文摘要
• 三、前言
• 四、正文
• 1、材料和方法
• 2、结果
• 3、讨论
• 4、结论
• 五、参考文献
• 六、致谢
• 七、综述