超级杂交稻母本株1S CHLH cDNA的生物信息学分析与克隆

论文摘要

超级杂交稻是在我国种植面积极广的一种水稻品种,目前我国的超级杂交稻在超高产育种领域已取得了令世界瞩目的成就。对脱落酸结合蛋白研究是研究脱落酸受体的重要途径,脱落酸受体一直是研究脱落酸信号转导的热点,并取得了很多进展。本研究利用生物信息学方法结合分子生物学、遗传学等手段,为研究脱落酸受体镁离子螯合酶H亚基（Mg-chelatase H subunit,CHLH）提供了帮助。本研究通过生物信息学分析为基础,利用拟南芥中编码CHLH的cDNA,对水稻核酸数据库和水稻EST数据库进行检索,通过得到的EST序列和检索到的水稻核酸序列进行比较分析,得到水稻CHLH的cDNA。以超级杂交稻母本株1S为材料提取总RNA,并反转录成cDNA,用得到的序列设计特异引物,经PCR扩增出株1S cDNA片段,cDNA片段经T-A克隆后进行测序,获得一条长1350bp序列和一条长871bp序列。提交1350bp序列至GenBank数据库后接收,登录号为EU569725。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 超级杂交稻育种的新要求
• 2 植物中脱落酸的生理作用
• 2.1 脱落酸在植物生长发育中的作用
• 2.1.1 抑制与促进生长
• 2.1.2 影响芽与种子休眠
• 2.1.3 影响开花
• 2.2 脱落酸在植物抗性方面的作用
• 2.2.1 脱落酸的抗逆性作用
• 2.2.2 脱落酸的抗病性作用
• 3 植物中脱落酸信号的传递
• 3.1 脱落酸信号的感受
• 3.2 脱落酸信号的转导
• 4 镁离子螯合酶的研究
• 5 论文研究内容与意义
• 第二章 生物信息学分析
• 1 水稻CHLH cDNA的获得
• 1.1 拟南芥CHLH序列的检索
• 1.2 水稻CHLH基因的电子克隆
• 2 生物信息学分析与比对
• 2.1 氨基酸序列的推测
• 2.2 蛋白质同源性比对
• 2.3 蛋白质二级结构的预测
• 2.4 蛋白质的跨膜区预测与亚细胞定位
• 2.5 蛋白质的功能结构域预测
• 2.6 系统进化分析
• 3 讨论
• 第三章 超级杂交稻CHLH cDNA序列的克隆
• 1 材料
• 1.1 植物材料
• 1.2 菌株
• 2 试剂与仪器
• 2.1 试剂
• 2.2 主要仪器
• 3 实验方法
• 3.1 总RNA的提取及其质量检测
• 3.1.1 总RNA的提取
• 3.1.2 总RNA的质量检测
• 3.2 用RT-PCR的方法获得CHLH cDNA片段
• 3.2.1 引物的设计
• 3.2.2 cDNA第一链的合成
• 3.2.3 CHLH cDNA片段的PCR扩增
• 3.2.4 切胶回收目的片段
• 3.2.5 将回收的目的片段克隆到PMD19-T载体上
• 3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
• 3.2.7 目的片段的鉴定及测定
• 4 结果与分析
• 4.1 提取的总RNA的完整性检测
• 4.2 CHLH cDNA片段的PCR扩增
• 4.3 CHLH cDNA片段的克隆
• 5 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录A
• 附录B
• 附录C
• 附录D
• 附录E
• 致谢
• 作者简介