中华鳖疾病综合防控技术的研究

论文摘要

随着我省中华鳖养殖业的迅猛发展,中华鳖疾病的发生也日益突出,为预防和控制中华鳖疾病的发生,减少对养鳖业带来的巨大经济损失,从2010年4月到10月对河北省6个县市的1256亩养殖面积开展了中华鳖的流行病学调查,查明我省中华鳖的发病情况、流行规律及病害属性;在此基础上,确定我省中华鳖疾病的发病原因,并提出相应的防治措施。主要研究内容包括:1.通过对我省2010年4月到10月7个月的中华鳖流行病学调查得知:中华鳖病害的发病原因中,主要是生物性病原,占所有病原的比例高达92.3%。在生物源病害中细菌性疾病居首位,达66.67%,病毒性疾病占16.67%,真菌性疾病占16.67%。中华鳖病害主要是红底板病,其次为白底板病、腐皮病和白点病等;其中8月份为我省中华鳖疾病高发月,发病率最高达到6.42%,死亡率达到3.24%2.从中华鳖病鳖中分离、纯化到四种病原菌,经鉴定四种病原菌分别为:嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、迟钝爱德华氏菌和弗氏柠檬酸杆菌;并根据嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、迟钝爱德华氏菌和弗氏柠檬酸杆菌各自保守的16S rRNA基因序列,合成了四对特异性引物,建立了四种主要病原菌的多重PCR检测方法。特异性试验表明,该方法对四种病原菌均能扩增出各自的阳性条带;采用模板稀释方法测定多重PCR检测方法的灵感性,该多重PCR最低检测水平分别为:迟钝爱德华氏菌1个菌,嗜水气单胞菌1个菌,弗氏柠檬酸杆菌3个菌,维氏气单胞菌9个菌。3.采用对照试验,检测中草药和西药对中华鳖疾病的治疗效果,并测定中草药对中华鳖免疫力的影响和药物残留情况。实验证明:中草药和西药对中华鳖的相对保护率分别为77.1%和79.1%,两者相差不大;通过血细胞吞噬功能、血清凝集效价和血清杀菌活力的测定表明中草药能显著提高中华鳖免疫力;药物残留试验表明在药物停用第四天后基本检测不到中草药的有效成分。4.以溶氧、总氮、氨态氮（NH3-N）、亚硝酸盐氮（NO2-N）、硝酸盐氮（NO3-N）、COD、叶绿素a等为主要水质指标研究空心菜、水芹菜、空心菜和水芹菜组成的复合生物浮床及微生态制剂对中华鳖养殖水质的净化作用。结果表明,在相同监测时间下,总氮、NH3-N、NO2-N、NO3-N、COD、叶绿素a等各项指标按空心菜+水芹菜组、空心菜组、水芹菜组和微生态制剂组的顺序呈逐渐降低的趋势,溶解氧按微生态制剂组、水芹组、空心菜组和空心菜+水芹菜组的顺序呈逐渐升高的趋势;与对照组相比,试验组中浮游植物的硅藻、隐藻品种、比例增加,蓝藻比例降低;浮游植物群落组成由绿藻-蓝藻型转向绿藻-硅藻型;浮游动物中轮虫数量增加;试验组能明显增加浮游生物的数量,加快生物循环,有效降低水体内有害细菌,增加有益菌群;试验期间内各种理化因子、有益菌群向着有利方面持续变化;试验空心菜+水芹菜组的中华鳖的存活率和增重率分别提高6.9%和58.4%;说明在养殖水体中采用浮床栽培水生蔬菜能够促进水体物质循环,加强水体自净功能。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 文献综述
• 1.1 中华鳖的生物学特征
• 1.2 中华鳖疾病的概况
• 1.2.1 中华鳖疾病的病害属性和主要种类
• 1.2.1.1 生物性疾病
• 1.2.1.2 非生物性疾病
• 1.3 中华鳖养殖水质的环境因素
• 1.3.1 生物因素
• 1.3.2 非生物因素
• 1.4 中华鳖疾病的综合防治
• 1.4.1 药物防治
• 1.4.2 免疫防治
• 1.4.3 生态防治
• 2 河北省中华鳖流行病学调查
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.1.1 调查对象
• 2.1.1.2 动物材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.2.1 流行病学调查
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 流行病学调查结果
• 2.2.2 病害属性分析
• 2.2.3 月度病害情况分析
• 2.2.4 病害产生原因分析
• 2.3 小结
• 3 中华鳖主要疾病病原菌快速检测技术的建立
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.1.1 菌株
• 3.1.1.2 培养基和试剂
• 3.1.2 方法
• 3.1.2.1 病理学变化
• 3.1.2.2 病原菌分离与纯培养
• 3.1.2.3 病原菌的鉴定
• 3.1.2.3.1 细菌形态观察
• 3.1.2.3.2 三糖铁琼脂生化试验
• 3.1.2.3.3 微量生化试验
• 3.1.2.3.4 四种病原菌16S rRNA 基因扩增及克隆
• 3.1.2.4 多重PCR 方法的建立
• 3.1.2.4.1 细菌的培养
• 3.1.2.4.2 引物的合成
• 3.1.2.4.3 DNA 的制备
• 3.1.2.4.4 PCR 条件的优化
• 3.1.2.4.5 多重PCR 条件的优化
• 3.1.2.4.6 多重PCR 特异性测定
• 3.1.2.4.7 多重PCR 灵敏性测定
• 3.2 结果
• 3.2.1 病死中华鳖解剖结果
• 3.2.2 病原菌的分离结果
• 3.2.3 病原菌的鉴定结果
• 3.2.4 病原菌16S rDNA 基因的PCR 扩增结果
• 3.2.5 分离菌株基因的测序及序列比对结果
• 3.2.6 单个病原菌PCR 条件优化结果
• 3.2.7 多重PCR 条件优化结果
• 3.2.8 多重PCR 特异性检测结果
• 3.2.9 多重PCR 敏感性检测结果
• 3.3 小结
• 4 中草药防治中华鳖疾病的试验研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.1.1 菌株
• 4.1.1.2 试剂
• 4.1.1.3 实验动物
• 4.1.2 方法
• 4.1.2.1 嗜水气单胞菌的培养
• 4.1.2.2 中华鳖的攻毒试验
• 4.1.2.3 中草药治疗试验
• 4.1.2.4 中草药治疗试验
• 4.1.2.4.1 中华鳖血细胞吞噬功能的测定
• 4.1.2.4.2 中华鳖血清凝集效价的测定
• 4.1.2.4.3 中华鳖血清杀菌活力的测定
• 4.1.2.4.4 药物残留测定试验
• 4.2 结果
• 4.2.1 中草药治疗试验结果
• 4.2.2 中华鳖血细胞吞噬功能的测定结果
• 4.2.3 中华鳖血清凝集效价的测定结果
• 4.2.4 中华鳖血清杀菌活力的测定结果
• 4.2.5 药物残留测定试验结果
• 4.3 小结
• 5 复合生物浮床技术净化养殖用水的研究
• 5.1 材料和方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.1.1 主要溶液的配制
• 5.1.1.2 主要仪器
• 5.1.1.3 试验动物
• 5.1.2 方法
• 5.1.2.1 水化学指标的测定
• 5.1.2.1.1 氨氮的测定方法
• 5.1.2.1.2 亚硝酸盐氮的测定方法
• 5.1.2.1.3 硝酸盐氮的测定方法
• 5.1.2.1.4 有机耗氧量的测定方法
• 5.1.2.1.5 总氮的测定方法
• 5.1.2.1.6 溶氧的测定方法
• 5.1.2.2 细菌菌群的分类计数
• 5.1.2.3 浮游生物的测定
• 5.1.2.3.1 浮游植物的测定
• 5.1.2.3.2 浮游动物的测定
• 5.1.2.4 各试验组发病情况的测定
• 5.1.2.5 各试验组生长指标及效益情况
• 5.2 结果
• 5.2.1 水化学指标测定结果
• 5.2.2 细菌菌群的分类计数结果
• 5.2.3 浮游植物测定结果
• 5.2.3.1 试验期间养鳖水体浮游植物的种类组成
• 5.2.3.2 试验期间养鳖水体浮游植物生物种群结构、数量的变化结果
• 5.2.3.3 试验期间养鳖水体中浮游植物的优势种及优势种群的变化
• 5.2.3.4 试验期间养鳖水体浮游植物多样性指数及绿藻商
• 5.2.4 浮游动物的测定结果
• 5.2.5 各试验组发病情况的测定结果
• 5.2.6 水生蔬菜安全性检测
• 5.2.7 各试验组生长指标及效益情况
• 5.3 小结
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 后记（含致谢）
• 攻读学位期间取得的科研成果清单