祖师麻对小鼠巨噬细胞分泌VEGF和表达HIF-1的干预作用研究

论文摘要

目的观察祖师麻注射液对小鼠巨噬细胞RAW264.7在脂多糖（Lipopolysaccharides, LPS）刺激下分泌血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）及缺氧诱导因子-1（Hypoxia-inducible factor-1,HIF-1）表达的影响,探讨祖师麻注射液抗血管生成的作用及机制。方法1分组小鼠巨噬细胞RAW264.7经培养后,实验分组如下:（1）祖师麻组7组:给予10μg/ml LPS刺激的同时,分别加入终浓度为218.7 mg/ml、72.9 mg/ml、24.3 mg/ml、8.1 mg/ml、2.7 mg/ml、0.9 mg/ml、0.3 mg/ml的祖师麻注射液;（2）空白对照组:无处理因素;（3）阴性对照组（LPS组）:单加10μg/ml LPS。2检测方法2.1 MTT法检测巨噬细胞的增殖培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,96孔板每孔接种1×104个细胞,孵育48 h后,按上述分组进行处理。继续培养48 h后依次加入MTT与DMSO,酶标仪读数测各孔吸光度值。2.2 ELISA方法检测巨噬细胞VEGF的含量24孔板每孔接种5×104个细胞,孵育48 h后,按实验分组进行处理,祖师麻组取2.1中作用较好的3组,祖师麻注射液终浓度分别为218.7 mg/ml、72.9 mg/ml、24.3 mg/ml。继续培养48 h后收集培养液,离心,取上清,按照ELISA试剂盒说明书操作,检测巨噬细胞分泌VEGF的含量。2.3 Western Blot方法检测巨噬细胞HIF-1蛋白的表达以每孔1×106个细胞的密度接种细胞于6孔板,培养24 h后,按实验分组进行处理,祖师麻组取2.1中作用较好的3组,祖师麻注射液终浓度分别为218.7 mg/ml、72.9 mg/ml、24.3 mg/ml。培养48 h后,RIPA缓冲液溶解细胞,离心,取上清,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）;将电泳后的蛋白转移至硝酸纤维素膜（Nitrocellulose Blotting Membranes,NC）上;HIF-1抗体、Ⅱ抗分别与膜孵育;显影,分析条带吸光度值。结果1祖师麻对巨噬细胞增殖的影响MTT法检测结果显示,祖师麻对细胞增殖的抑制率随着药物浓度的降低而下降,抑制率从34.04%（祖师麻218.7 mg/ml）下降至2.28%（祖师麻0.3 mg/ml）。其中218.7 mg/ml、72.9 mg/ml、24.3 mg/ml剂量祖师麻组的吸光度值分别为0.45±0.06、0.54±0.09、0.57±0.12,与阴性对照组（LPS组）0.68±0.20相比较有显著性差异（p<0.05或p<0.01）。而8.1 mg/ml、2.7 mg/ml、0.9 mg/ml、0.3 mg/ml剂量祖师麻组的吸光度值与对照组相比没有显著性差异（P>0.05）。2祖师麻对巨噬细胞分泌VEGF的影响祖师麻注射液浓度在218.7 mg/ml、72.9 mg/ml和24.3 mg/ml时均可抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7在10μg/ml脂多糖刺激下分泌的VEGF增多,其VEGF分泌量分别为1029±175 pg/ml、1575±186 pg/ml、1550±217 pg/ml,与阴性对照组（LPS组）1895±155 pg/ml相比较有显著性差异（p<0.05或p<0.01）。3祖师麻对巨噬细胞表达HIF-1的影响Western Blot检测结果显示,祖师麻注射液浓度在218.7 mg/ml、72.9 mg/ml和24.3 mg/ml时均可抑制LPS刺激巨噬细胞RAW264.7对HIF-1的表达,HIF-1的吸光度值分别为1.53±0.10、2.82±0.09、5.89±0.25,与阴性对照组（LPS组）比较,差异有显著性意义（p<0.01）。结论祖师麻注射液可抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌VEGF,其机理与抑制HIF-1的表达密切相关。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：祖师麻对小鼠巨噬细胞分泌 VEGF 和表达 HIF-1 的干预作用研究
• 前言
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 结论
• 创新性及意义
• 参考文献
• 综述一 瑞香素药理作用研究现状
• 综述二 缺氧诱导因子-1 与疾病
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文