脱有机硫微生物的分离、鉴定及其选育

论文摘要

专一性微生物脱硫技术能选择地性脱除加氢脱硫技术难以脱除的芳香族含硫化合物,是实现石油及其产品深度脱硫有效的技术之一。分离筛选优良的菌株,选育高效的脱硫菌是提高微生物脱硫能力的重要途径。本文以此为研究目标,开展了专一性脱硫菌株的分离鉴定、选育以及脱硫条件优化等方面的研究。本试验从大庆油田被石油污染的土壤中分离筛选到了一株脱硫能力较高的专一性脱硫菌HDBS-1,经常规生理生化鉴定及16S rDNA系统发育分析,确定该菌为坂崎肠杆菌,故将该菌命名为Enterobacter sakazakii HDBS-1。Enterobacter sakazakii HDBS-1经UV诱变、DES诱变及UV、DES复合诱变后,得到一株脱硫能力最高的HDBS-4。经比色法测定,诱变后菌株降解DBT产生2-HBP的量达0.011726mmol/L,是出发菌株量（0.002553mmol/L）的4.5倍多。最佳诱变剂量为紫外照射时间为17s,DES诱变（终浓度为0.3%）处理时间为25min。将HDBS-4连续传代10次后,遗传性状稳定。为了获得更高的脱硫力,对HDBS-4的培养基和脱硫条件进行了优化。通过单因子试验获得最佳培养基配方为（/L）:甘油10mL,酵母提取物2g,DBT 20mg,磷酸二氢钾2.44g,磷酸氢二钠12.03g,氯化镁0.4g,氯化锰4mg,氯化铁1mg,氯化钙0.75mg,pH值7.0～7.5。并确定接种量为6%,装液量为20mL/250mL,30℃,300r/min摇床培养5天。在最佳脱硫条件下,培养液中2-HBP含量可达0.0359mmol/L,是优化前的近3倍,出发菌株HDBS-1的近13倍。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语表
• 第1章 前言
• 1.1 石油脱硫技术研究概况
• 1.1.1 物理法
• 1.1.2 化学法
• 1.1.3 生物法
• 1.2 微生物脱硫研究进展
• 1.2.1 微生物脱硫研究的历史概况
• 1.2.2 脱硫微生物种类
• 1.2.3 微生物脱硫的机理
• 1.2.4 微生物脱硫的应用情况
• 1.2.5 存在的问题及发展趋势
• 1.3 本研究的目的、意义和内容
• 1.3.1 本研究的目的和意义
• 1.3.2 本研究的主要内容
• 第2章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 土样
• 2.1.2 试验菌株
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 主要药品及试剂
• 2.1.5 主要仪器及设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 土样的采集
• 2.2.2 脱有机硫菌株的分离、纯化与保藏
• 2.2.3 专一性脱硫菌株的筛选
• 2.2.4 菌株的鉴定
• 2.2.5 菌株的选育
• 2.2.6 脱硫条件的优化
• 2.2.7 高效液相色谱法测定2-HBP 含量的初步摸索
• 第3章 结果与分析
• 3.1 脱硫菌株的分离、筛选结果
• 3.2 专一性脱硫菌株的分离、筛选结果
• 3.2.1 2-HBP 标准曲线的绘制
• 3.2.2 专一性脱硫菌株的筛选结果
• 3.3 菌株 HDBS-1 的鉴定
• 3.3.1 形态及生理生化鉴定结果
• 3.3.2 16S rDNA 系统发育分析结果
• 3.4 菌株的选育
• 3.4.1 初始菌株HDBS-1 生长曲线的绘制
• 3.4.2 紫外诱变
• 3.4.3 DES 诱变
• 3.4.4 复合诱变
• 3.4.5 HDBS-4 遗传稳定性分析及其遗传图谱的绘制
• 3.5 HDBS-4 脱硫条件的优化及测定
• 3.5.1 HDBS-4 脱硫条件的优化
• 3.5.2 最佳脱硫条件下HDBS-4 脱硫力的检测
• 第4章 讨论
• 4.1 专一性脱硫菌株的筛选
• 4.2 测定方法的选择
• 4.2.1 比色法
• 4.2.2 高效液相色谱法
• 4.3 诱变育种
• 4.4 脱硫条件优化
• 4.5 工作设想
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录