论文题目: 1.人类多巴胺应答基因-1，DRG-1功能的初步鉴定 2.人类基因LASS2与其酵母同源基因LAG1的功能互补研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 遗传学
作者: 余垚
导师: 李育阳,吕红
关键词: 多巴胺,增殖,质粒丢失实验,四分子分析
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 人类多巴胺应答基因-1，DRG-1在2002年被克隆到。在多巴胺刺激后，DRG-1在大鼠星状胶质细胞中的表达发生上调。但是它的具体功能仍然未知。在本实验中，我们发现DRG-1是一个在后生动物中保守的基因，而且在同源基因的启动子区域都含有一个NF-κB的结合位点。组织表达谱的研究表明，DRG-1在人的肝，肾，胰腺和脾脏中的表达量较高。在酵母双杂交的筛选中，DRG-1可以与p75NTR介导的细胞死亡的执行蛋白(NADE)相结合。该结合在体内免疫共沉淀实验和体外GST pull down实验中都得到了验证，而且DRG-1和NADE共定位于293和PC12细胞的胞浆中。系列缺失实验表明两者之间的结合是通过DRG-1的N端1-150氨基酸和NADE的C端59-111氨基酸区域来介导的。在MTT细胞增殖测试中，稳定表达的DRG-1可以促进293细胞的增殖。而过量表达NADE可以抑制DRG-1所促进的细胞生长。上述结果为通过多巴胺刺激上调DRG-1表达的机制提供了解释，并且暗示DRG-1参与了多巴胺受体诱导的细胞增殖，而这种增殖可以被NADE负调控。长寿保障基因LAG1是在酿酒酵母中被克隆到的第一个衰老相关基因。LAG1及其酵母中的同源基因LAC1编码神经酰胺合成酶的催化亚基。在不同的遗传背景下，LAG1和LAC1的双突变可以导致酵母菌生长极为缓慢或者致死。一些LAG1的同源基因可以通过功能互补LAG1来拯救lag1 Δlac1 Δ的缺陷表型。 人类基因LASS2与LAG1同源，它编码的蛋白含有一个保守的TLC domain和一个特殊的HOX domain。本实验通过质粒丢失实验和四分子分析实验分别检测了全长LASS2，去除HOX domain而保留TLC domain的LASS2片断(LASS2ΔHOX)与Lag1p功能互补的可能。但无论是在天然的LAG1启动子，或是在ADH1强启动子的控制下，LASS2和LASS2-LD都不能拯救lag1 Δlac1 Δ菌株生长极为缓慢的表型。该结果表示LASS2和LASS2 ΔHOX不能在功能上互补LAG1。
论文目录:
第一部分:人类多巴胺应答基因-1,DRG-1功能的初步鉴定
摘要
Abstract
前言
材料方法
结果
一.在酵母双杂交筛选中,DRG-1与NADE结合
二.DRG-1的生物信息学分析和组织表达谱
三.DRG-1与NADE相互作用的验证
四.DRG-1和NADE结合区域的确定
五.DRG-1和NADE对于细胞增殖的影响
六.DRG-1和NADE对于细胞凋亡的影响
讨论
参考文献
第二部分:人类基因LASS2与其酵母同源基因LAG1的功能互补研究
摘要
Abstract
前言
材料方法
结果
一.LASS2的生物信息学分析
二.LASS2在质粒丢失实验中不能互补LAG1
三.LASS2在四分子分析实验中不能互补LAG1
四.LASS2ΔHOX在质粒丢失实验中不能互补LAG1
五.LASS2ΔHOX在四分子分析实验中不能互补LAG1
六.结论
讨论
参考文献
综述:p75神经营养因子受体介导的细胞凋亡
发表文章
致谢
发布时间: 2007-06-28
参考文献
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