论文摘要
目的:为探讨蒿甲醚治疗光敏性皮肤病的机理,观察一定剂量不同波长紫外线照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞活性的影响及其表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响。方法:采用45.00mJ/cm2剂量的UVB及4.00J/cm2剂量的UVA照射培养的永生化HaCaT角质形成细胞,以羟氯喹及不同浓度的中药蒿甲醚进行干预处理,应用MTT法,免疫组化法及其流式细胞仪检测紫外线辐照及羟氯喹和蒿甲醚处理后HaCaT细胞活性变化以及Fas和Bcl-2蛋白水平的变化。分组如下:将亚融合状态的培养细胞分为未照射组、UVA组、UVA+羟氯喹组(UVA照射加终浓度为50μg/mL的羟氯喹)、UVA+蒿甲醚1组、UVA+蒿甲醚2组、UVA+蒿甲醚3组、UVA+蒿甲醚4组(分别为照射UVA后分别加入终浓度为25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL的蒿甲醚)。UVB组、UVB+羟氯喹组、UVB+蒿甲醚1组、UVB+蒿甲醚2组、UVB+蒿甲醚3组、UVB+蒿甲醚4组(为照射UVB后加入相应终浓度的药物)。结果:MTT结果:羟氯喹及小剂量(≤50μg/ml)蒿甲醚对细胞活性影响不明显,而≥100μg/ml蒿甲醚增加细胞活性,但浓度超过200μg/ml,可见大量细胞悬浮于培养液上;流式细胞仪检测结果:1与未照射组相比UVA、UVB照射均可使HaCaT细胞表达Fas增加;2.与UV组相比UVA加羟氯喹,UVB、UVA加25μg/mL蒿甲醚组使HaCaT细胞表达Fas减少;3.与未照射组相比UVA、UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;4.与UV组相比UVA加25μg/mL蒿甲醚组和UVB加100μg/mL蒿甲醚组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加。免疫组化法结果:1.与未照射组相比UVA、UVB照射均可使HaCaT细胞表达Fas增加;2.与UV组相比UVA加羟氯喹组、UVA加25μg/mL蒿甲醚组、UVA加50μg/mL蒿甲醚组、UVA加100μg/mL蒿甲醚组使HaCaT细胞表达Fas减少,UVB加羟氯喹组、UVB加25μg/mL蒿甲醚组、UVB加50μg/mL蒿甲醚组、UVB加100μg/mL蒿甲醚组使HaCaT细胞表达Fas减少;3.与未照射组相比UVA、UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;4.与UV组相比UVA加羟氯喹组和UVB加羟氯喹组、UVB加25μg/mL蒿甲醚组、UVB加50μg/mL蒿甲醚组、UVB加100μg/mL蒿甲醚组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加。结论小剂量蒿甲醚可以抑制HaCaT细胞凋亡,具有一定的保护作用。蒿甲醚可能通过影响与凋亡相关的Fas和Bcl-2的表达,减少紫外线诱导的HaCaT细胞的凋亡。
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