近交系大鼠主要组织相容性复合体（RT1）遗传检测方法的建立

论文摘要

近年来随着生命科学的迅猛发展，人们对近交系大鼠的遗传品质要求越来越高，现有的遗传检测方法已经不能满足当前科学研究的需要。近交系大鼠主要组织相容性复合体（RT1）是决定近交系大鼠免疫遗传品质最主要的基因群，也是进行近交系大鼠遗传学检测的一个重要遗传标记。目前，国内外通过对主要组织相容性复合体（RT1）研究来监测近交系大鼠遗传质量的报道比较少。本论文就近交系大鼠的主要组织相容性复合体（RT1），从血清学和分子生物学两个方面对其进行了研究，并对部分常用近交系大鼠进行了遗传检测，初步建立了新的近交系大鼠遗传学检测方法。本研究分两个部分。第一部分是近交系大鼠的主要组织相容性复合体（RT1）的血清学检测方法即微量细胞毒法的建立。首先是应用混合免疫程序制备用于检测三种近交系大鼠BN／CrlBR（RT1n）、LEW／CrlBR（RT11）、F344／CrCrlBR(RT11v1)的品系特异性抗血清（SSTA）。制备SSTA主要是针对各品系大鼠细胞表面主要组织相容性复合体Ⅰ类抗原和淋巴细胞表面RT6，RT7等分化抗原进行检测。其次是待检测各近交品系大鼠脾淋巴细胞悬液的制备。细胞悬液中脾淋巴细胞的最佳浓度是2×106cells／ml，淋巴细胞活力要求达到95％以上。最后，通过脾淋巴细胞、SSTA与补体特异性反应后的细胞存活数量来判定已制备好的SSTA针对不同品系来源的脾淋巴细胞的效价。本实验结果表明品系特异性抗血清（SSTA）介导的微量细胞毒法能够较好地应用于近交系大鼠遗传学检测，具有方法简便、灵敏度高和重复性好等特点。本研究的第二部分是利用主要组织相容性复合体（RT1）单倍体基因型的不同，从DNA水平对近交系大鼠进行分型、检测。首先，设计两对通用引物，分别对近交系大鼠（BN／CrlBR、LEW／CrlBR、F344／CrCrlBR、SHR／NCrlBR）主要组织相容性复合体（RT1）的RT1Ba，RT1Db中品系特异性强的片段进行扩增。BN／CrlBR（RT1n）品系RT1Ba扩增片段长度为742 bp，LEW／CrlBR（RT11），F344／CrCrlBR（RT11），SHR／NCrlBR（RT1k）品系RT1Ba扩增片段长度为764bp。BN／CrlBR（RT1n）、LEW／CrlBR（RT11）、F344／CrCrlBR（RT11）、SHR／NCrlBR（RT1k）品系RT1 Db扩增片段长度均为384 bp。其次在确定各扩增片段符合设计长度后，将已扩增片段胶回收，经过连接、转化、测序，最后进行BLAST比对以验证各扩增片段正确性。根据测序正确的PCR产物碱基数目，类别的不同，分别通过酶切鉴定，聚丙烯酰胺凝胶电泳，PCR等手段对各个品系加以区分。这些研究不仅为各近交大鼠品系的遗传分析和品系间的鉴别提供了实验依据，而且还为近交系大鼠遗传检测提供了新的方法。以上研究结果表明，通过微量细胞毒法能够在血清学水平对不同近交系大鼠进行鉴别；根据近交系大鼠间RT1单倍体基因型等的不同，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶切电泳等常规的分子生物学方法能够从DNA水平对不同品系近交系大鼠进行遗传学的分型检测，在PCR水平建立了新的近交系大鼠遗传学检测方法。这些研究为近交系大鼠遗传质量控制提供了新的遗传检测手段，对提高实验动物的质量、满足生命科学发展的需要具有重要意义。

论文目录

• 一、缩略语索引
• 二、中文摘要
• 三、英文摘要
• 四、前言
• 五、第一部分 近交系大鼠微量细胞毒检测
• （一） 材料和方法
• （二） 实验结果
• （三） 分析与讨论
• （四） 实验小结
• 六、第二部分 近交系大鼠分子生物学检测
• （一） 材料和方法
• （二） 实验结果
• （三） 分析与讨论
• （四） 实验小结
• 七、实验总结
• 八、参考文献
• 九、文献综述
• 十、致谢