论文摘要
目的:探讨RNA干扰细胞周期检测点激酶53BP1、MDC1对体内外食管鳞癌细胞中p53、CHK1、CHK2、CHK2-T68蛋白表达的影响。方法:首先利用RNA干扰技术构建未转染、空载体转染、MDC1转染、53BP1转染四种食管癌Eca109细胞株。分别接种四种细胞至六孔板内,制备细胞爬片,接受5Gyγ射线照射后0h、0.5h、1h、2h、4h和12h收集细胞。应用免疫细胞化学方法检测四种细胞株在各时间点CHK2-T68蛋白的表达情况,均设6个平行组。其次,培养四种细胞至最佳致瘤细胞数,建立裸鼠人食管鳞癌模型,分为未照射组:未转染组（A组）、空载体转染组（B组）、53BP1转染组（C组）、MDC1转染组（D组）;照射组:未转染+照射组（E组）、空载体转染+照射组（F组）、53BP1转染+照射组（G组）、MDC1转染+照射组（H组）,每组6只裸鼠。照射后1h处死裸鼠,剥离肿瘤,应用免疫组化S-P法检测各组标本中p53、CHK1、CHK2蛋白的表达。利用SPSS for Windows 13.0统计分析软件包中重复测量的方差分析和单因素方差分析对结果进行处理分析。实验数据以均数±标准差（±s）表示,以α=0.05为检验水准,当P<0.05时具有统计学意义。结果:体外实验:未转染组在照射后0h、0.5h、1h、2h、4h和12h时CHK2-T68蛋白的阳性表达细胞数（/200个）分别为7±3.08、72±9.54、90±11.31、79±12.08、55±11.27和6±2.64;空载体转染组在各时间点CHK2-T68蛋白的阳性表达细胞数（/200个）分别为8±3.31、72±10.17、89±14.40、76±11.76、53±8.69、6±2.04;两者均在照射后1h内表达增多,之后逐渐下降,至照射后12h降至照射前水平。空载体转染组的变化趋势与未转染组相同（P>0.05）。MDC1转染组在各时间点CHK2-T68蛋白的阳性表达细胞数（/200个）分别为6±2.16、55±8.91、72±10.78、61±9.54、42±6.63、5±1.75;MDC1转染后CHK2-T68蛋白的表达峰值稍有下降（P<0.05）,但变化趋势同未转染组。53BP1转染组CHK2-T68蛋白在各时间点的阳性表达细胞数（/200个）分别为6±2.17、40±9.30、49±10.37、41±10.80、29±11.20、6±2.16;与未转染组比较峰值明显降低（P<0.05）,53BP1转染后CHK2-T68蛋白的表达峰值低于MDC1转染组（P<0.05）,但变化趋势相同。体内实验:（1）p53蛋白在未转染组、空载体转染组、MDC1转染组、53BP1转染组食管鳞癌组织中的阳性表达细胞数（/200个）分别为: 54±13.43、57±14.47、25±14.61、48±17.22,各组间有统计学意义（P=0.01）。抑制53BP1蛋白表达可以降低P53蛋白表达（P=0.01）。CHK1蛋白在A、B、C、D组食管鳞癌组织中的阳性表达细胞数（/200个）分别为: 54±13.25、50±14.67、78±19.39、59±16.11,各组间有统计学意义（P=0.03）。抑制53BP1蛋白表达增加CHK1蛋白表达（P=0.04）。CHK2蛋白在A、B、C、D组食管鳞癌组织中的阳性表达细胞数（/200个）分别为: 62±14.56、57±14.08、82±11.72、55±13.44 ,各组间有统计学意义（P=0.01）。抑制53BP1蛋白表达增加CHK2蛋白表达（P=0.04）。（2）p53蛋白在E、F、G、H组食管鳞癌组织中的阳性表达细胞数（/200个）分别为: 94±15.25、88±25.05、60±16.18、81±20.57,各组间有统计学意义（P=0.04）。与单纯照射组相比,53BP1转染+照射组P53蛋白的表达降低（P=0.02）。CHK1蛋白在E、F、G、H组食管鳞癌组织中的阳性表达细胞数（/200个）分别为: 35±14.32、30±12.52、56±12.33、38±13.85,各组间有统计学意义（P=0.02）。与单纯照射组相比,53BP1转染+照射组CHK1蛋白的表达升高（P=0.03）。CHK2蛋白在E、F、G、H组食管鳞癌组织中的阳性表达细胞数（/200个）分别为: 41±13.30、34±14.66、63±15.67、36±12.09,各组间有统计学意义（P=0.01）。与单纯照射组相比,53BP1转染+照射组CHK2蛋白的表达升高（P=0.04）。结论:（1）抑制MDC1或53BP1蛋白表达使体外食管癌细胞照射后CHK2-T68磷酸化水平降低;（2）抑制53BP1蛋白表达可降低体内食管癌细胞中p53蛋白表达,升高CHK1、CHK2蛋白表达;（3）抑制MDC1蛋白表达不影响体内食管癌细胞中p53、CHK1、CHK2蛋白表达。
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