川芎嗪联合超声微泡介导内皮祖细胞移植治疗大鼠心肌梗死的研究

论文摘要

第一部分内皮祖细胞的分离、培养、鉴定目的：体外分离、培养、鉴定大鼠骨髓来源的内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs），并诱导分化成为成熟血管内皮细胞。方法：无菌分离大鼠四肢长骨，取骨髓冲洗液，Percoll密度梯度离心法分离单个核细胞，接种于人纤维连结蛋白（human fibronection，HFN）铺被的培养瓶，用加入人表皮生长因子（epidermal growthfactor，EGF）、大鼠血管内皮生长因子（vascular endothelial growthfactor，VEGF）、人碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growthfactor，bFGF）的完全培养基培养，对其进行细胞形态学，免疫细胞化学,流式细胞术，透射电镜，以及Dil-acLDL、FITC-UEA-1双荧光染色的检测。结果：可以从骨髓中分离出大量EPCs，且细胞增殖能力强，连续传代四次，细胞活性不降低。镜下观察随时间变化，细胞依次呈现圆形，椭圆形，梭形，条索形等形态，细胞集落生长并可呈网状、旋涡状生长后期呈典型的铺路石样形态。通过细胞免疫组织化学染色和流式细胞术发现，细胞表面标志物在不同时期表达率不同，其中CD133早期表达率高，随培养时间延长，表达率降低。透射电镜检查，后期细胞胞浆中发现W-P小体。激光共聚焦显微镜观察，Dil-acLDL、FITC-UEA-1双染。结论：密度梯度离心法，可以获得大量单个核细胞，经选择性完全培养基培养可获纯度较高的EPCs，并可在体外诱导分化成血管内皮细胞。第二部分川芎嗪联合超声微泡介导内皮祖细胞治疗大鼠心肌梗死目的：探讨在川芎嗪联合超声微泡的辅助下，内皮祖细胞移植可否更好归巢大鼠缺血心肌，达到治疗心肌梗死的效果。方法：大鼠心肌梗死模型制备：永久结扎冠状动脉左前降支。随机分为5个组（1）川芎嗪+EPCs+超声微泡组（2）川芎嗪+EPCs组（3）EPCs组，（4）空白对照组（5）单纯心肌梗死组。建模后第三天，经经尾静脉输入川芎嗪+EPCs+超声微泡混合液，同时超声转染治疗仪辐照大鼠心前区。细胞移植35d后M型超声心动图检测LVEF及FS以评价心功能，免疫组织化学法行5-溴脱氧尿嘧啶核酸（5-bromodeoxyuridine，5-Brdu）及血管内皮细胞粘附因子（Vascular cell adhere moldcular，VCAM）检测。结果：与其余组相比，川芎嗪+EPCs+超声微泡组射血分数及短轴缩短率增加，心梗区周围5-BrdU阳性细胞数及微血管密度增加。结论：川芎嗪联合超声微泡可增效大鼠骨髓EPCs定向归巢到大鼠缺血心肌，更好的促进缺血心肌的血管修复与再生，改善心功能。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 大鼠骨髓内皮祖细胞的分离、培养、鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第二部分 川芎嗪联合超声微泡增效内皮祖细胞移植治疗大鼠心肌梗死
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文情况