伊布利特对家兔左心室肌细胞钠离子通道跨壁异质性的影响

论文摘要

目的:由于心肌横断面上各层心肌细胞的复极存在非均一性,在一定条件下,为某些心律失常的发生提供了有利条件。心室肌中层细胞（M细胞）的电生理特性有别于心内膜下（Endo）、心外膜下（Epi）心肌细胞,使心肌各层的电活动呈非均一性,特别是对抗心律失常药物的反应呈现显著差异。心室肌快钠电流（INa）是在心肌细胞电生理异质性方面起着重要作用的离子通道电流。伊布利特（Ibutilide）是一种新近推出的Ⅲ类抗心律失常药物,主要用于快速转复心房颤动/心房扑动,近期动物试验中已证实,伊布利特对抑制室性心律失常也有作用。本课题利用全细胞膜片钳技术,旨在研究伊布利特对左室三层心室肌细胞的INa异质性的影响,从而探讨伊布利特抗室性心律失常作用的离子机制。材料与方法1实验动物:新西兰纯种大耳白兔30只,河北医科大学实验动物中心提供,雌雄不拘,体重2.0-2.5Kg。2心肌细胞分离:利用酶解的方法分离出三层心室肌细胞。3伊布利特给药方法及分组:将配好的伊布利特溶液稀释成10-7M和10-6M,并将其加入细胞外液进行灌流。依据灌流外液中有无伊布利特及伊布利特的浓度,将试验分为三组:正常对照组、伊布利特（10-7M）组、伊布利特（10-6M）组。4电流记录:应用膜片钳全细胞记录方法,记录三层心室肌细胞INa活性的变化,伊布利特对心室肌细胞INa活性的影响,并与正常对照组心肌细胞进行比较分析。电流记录的刺激程序由pulse+pulsefit 8.53软件控制,通道信号经EPC-9膜片钳放大器放大,通过Ag-AgCl电极丝和填充电极内液的微电极导入细胞,产生的电流信号经EPC-9转换,为pulse+pulsefit 8.53软件采集、分析。5统计学分析:统计学处理:数据以均数±标准差（χ-±s）表示,用SPSS 10.0软件包进行统计学处理,组间均数比较采用方差分析,以P<0.05作为显著性差异的标准。结果1对照组、伊布利特组各层细胞之间的钠通道异质性的变化1.1对照组、伊布利特组各层细胞INa峰值电流密度的变化正常对照组的中层细胞（M）、心内膜细胞（Endo）和心外膜细胞（Epi）INa峰值电流密度分别为-31.53±3.76 pA/pF （n=13 cells）、-15.22±2.67 pA/pF （n=12 cells）和-13.00±3.45pA/pF （n=10 cells）,M细胞与Epi和Endo之间比较P均小于0.01,而Epi和Endo之间比较无显著性差异,P>0.05。伊布利特（10-7M）组的M、Endo和Epi的INa峰值电流密度分别为-11.32±2.33 pA/pF（n=13 cells）、-9.64±3.42 pA/pF （n=10 ells）、-7.82±2.99 pA/pF （n=10 cells）,三者之间比较无显著差异,P>0.05。伊布利特（10-6M）组的M、Endo和Epi的INa峰值电流密度分别为-9.60±2.05 pA/pF（n=13 cells）、-6.02±2.58 pA/pF （n=10 cells）、-6.70±1.49 pA/pF （n=10 cells）,三者之间比较无显著差异。1.2对照组、伊布利特组各层细胞INa失活半数电压（V0.5）的变化正常对照组M、Epi和Endo的INa失活半数电压(V0.5)分别为-102.36±8.74mV（n=11cells）、-97.17±15.53 mV （n=11 cells）和-93.07±13.79mV（n=10 cells）,M与Epi和Endo比较有显著性差异,P<0.05,而Epi和Endo比较无显著性差异,P>0.05。伊布利特（10-7M）组的M、Endo和Epi的INaV0.5分别为-107.23±6.58 mV（n=11cells）,-102.01±7.32 mV（n=11cells）,-99.14±7.74 mV（n=11cells）,内层与外层比较无明显差异,其余均有显著差异。伊布利特（10-6M）组的M、Endo和Epi的INa失活半数电压（V0.5）分别为-124.56±8.22 mV（n=11cells）,-99.83±7.91 mV（n=11cells）,-108.15±6.92 mV（n=11cells）,内层与外层比较无明显差异,其余均有显著差异。1.3对照组、伊布利特组各层细胞INa失活后再恢复的变化伊布利特组与正常对照组相比较均无显著性差异,P>0.05,但伊布利特组各层细胞的灭活后再恢复明显减慢。2伊布利特对各层细胞钠通道活性的影响2.1伊布利特对各层细胞INa I-V曲线的影响三组之间的M细胞有显著差异P<0.05;对照组与伊布利特各组之间的Endo细胞有显著差异,P<0.01,伊布利特各组之间无显著差异;对照组与伊布利特各组之间Epi细胞有显著差异P<0.05,伊布利特各组之间无显著差异。2.2伊布利特对各层细胞INa稳态失活曲线的影响伊布利特各组与对照组之间的M细胞比较有显著差别P<0.05,伊布利特两组之间无显著差异;三组之间Endo细胞有显著差异P<0.05;对照组与伊布利特各组之间的Epi细胞有显著差异P<0.01,伊布利特两组之间无显著差异。2.3伊布利特对各层细胞INa失活后恢复曲线的影响伊布利特各组与正常对照组内中外层组间比较在45ms、95ms和145ms有显著差异,P<0.05,伊布利特两组之间各层比较也有差异P<0.05。结论1兔左室游离壁三层心肌细胞的快钠电流存在电生理异质性。INa异质性表现为M细胞较心内膜、心外膜有更大的峰值电流,M细胞的INa电压依赖稳态失活曲线失活最快,而失活后再恢复曲线三层细胞无显著差异。2本研究通过观察伊布利特对心室肌三层细胞钠离子通道的作用,并与正常对照组进行了对比分析。结果显示:应用伊布利特后,心室肌三层细胞钠离子通道受到抑制,其通道活性呈现均一性,使心肌细胞动作电位0相上升速率和幅度,动作电位时程趋向一致,有利于消除折返,可抑制室性快速性心律失常的发生。3本研究观察不同浓度伊布利特对心室肌三层细胞快钠离子通道的作用。结果显示,伊布利特对心室肌快钠通道有抑制作用,且在本实验中呈浓度依赖性,即伊布利特使INa I-V曲线及INa峰值电流密度下降,稳态失活曲线左移,失活后再恢复时间延长,且高浓度伊布利特对心肌细胞钠离子通道的抑制作用强于低浓度。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 伊布利特对家兔左心室肌细胞钠离子通道跨壁异质性的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 心室肌细胞电生理异质性与伊布利特抗心律失常的研究进展
• 致谢
• 个人简历