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维甲酸对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的诱导分化作用及其机理研究

2020-12-02阅读(883)

维甲酸对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的诱导分化作用及其机理研究

论文摘要

本论文在鉴定维甲酸（retinoic acid,RA）诱导入神经母细胞瘤SK-N-SH细胞终末分化基础上,应用蛋白质组学分析技术,对SK-N-SH细胞诱导分化过程中细胞蛋白质组变化进行初步研究。分析鉴定与神经母细胞瘤细胞增殖分化相关的特异性蛋白,并探索它们在神经母细胞瘤细胞诱导分化过程中的调控作用,以期能够在较为整体水平上进一步认识细胞癌变与逆转机理问题,从而找出细胞增殖与分化调控研究的新方向。实验结果显示,经1μmol/L RA处理之后,人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的增殖受到抑制,细胞生长抑制率达36.16%;细胞周期发生了G0/C1期阻滞;光镜与电镜观察结果显示,RA处理后SK-N-SH细胞形态和超微结构发生恢复性变化,产生了细胞呈极性状、伸出多个轴突树突状突起、细胞逐渐变小变圆并融合在一起形成类似神经节样结构、细胞表面微绒毛减少、核仁变少变小、常染色质增多、细胞器丰富发达等显著变化;免疫细胞化学检测显示RA处理后SK-N-SH细胞癌基因c-myc、C-fos的表达下调而抑癌基因p53、p27的表达上调,并进一步促使SK-N-SH细胞NSE、MAP2、Synaptophysin等神经元特异性标志物的表达。双向凝胶电泳分析显示在RA诱导SK-N-SH细胞分化前后存在26个差异表达蛋白点,质谱分析鉴定了其中16个蛋白,其中表达上调的蛋白点有:Rab GDP dissociationinhibitor,RABGAPIL protein（RAB GTPase activating protein 1-like）,DNM1T protein,SP110,Myoneurin,DNA topoisomeraseⅡbinding protein,Human iroquois-classhomeodomain protein IRX-5和Alpha-enolase,而BCL2/adenovirus E1B 19kDainteracting protein 1（BNIPl）和PHD finger protein 20-like 1为新出现的蛋白点;表达下调的蛋白为cell division cycle 73,interleukin-8,RAB37,Methyltransferase（DNMT）和Vav 3 oncogene protein,而HP protein为诱导处理后消失的蛋白点。获得鉴定的16个蛋白包括基因表达调控因子、肿瘤相关基因表达产物、神经细胞功能性蛋白、DNA损伤修复蛋白等,其中DNM1L、Myoneurin、IRX-5首次发现与细胞的癌变和分化相关,而PHD finger、SP110、IRX-5首次发现与神经细胞分化、神经母细胞瘤分化相关。研究结果表明,1μmol/L RA对入神经母细胞瘤SK-N-SH细胞具有显著的诱导分化作用,通过抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、调控癌基因和抑癌基因表达以及促进分化相关标志物表达促进细胞分化。在SK-N-SH细胞分化的同时,细胞蛋白质组成也相应发生明显变化,差异表达蛋白包括基因表达调控因子、肿瘤相关基因表达产物以及神经细胞功能性蛋白等,在神经母细胞瘤分化过程中的有重要作用。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 1. 肿瘤的危害及抗癌研究现状
  • 2. 肿瘤细胞诱导分化研究的理论和实践意义及发展方向
  • 2.1 肿瘤细胞诱导分化的概念及其理论实践意义
  • 2.2 肿瘤细胞诱导分化研究的现状及发展方向
  • 2.3 肿瘤细胞诱导分化研究中所存在的问题
  • 3. 系统生物学和蛋白质组学在肿瘤细胞研究中的应用
  • 4. 人神经母细胞瘤的生物学特性及其终末诱导分化研究
  • 4.1 神经母细胞瘤的生物学特性及其应用
  • 4.2 神经母细胞瘤细胞的诱导分化研究
  • 5. 本文的研究工作及其科学意义
  • 材料与方法
  • 1. 细胞培养和诱导分化处理
  • 2. 细胞生长曲线测定
  • 3. 细胞周期测定
  • 4. 细胞形态光镜观察样品的制备与观察
  • 5. 电子显微镜样品制备和观察
  • 6. 癌基因、抑癌基因蛋白的免疫细胞化学检测
  • 7. 神经细胞诱导分化指标免疫细胞化学观察
  • 8. 人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分化诱导前后全细胞蛋白的双向凝胶电泳分析
  • 9. 差异蛋白点MALDI-TOF质谱鉴定
  • 实验结果
  • 1. RA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的抑制作用
  • 2. RA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞形态影响
  • 3. RA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞癌基因、抑癌基因表达的影响
  • 4. RA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分化指标相关蛋白表达的影响
  • 5. RA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞全细胞蛋白表达的影响
  • 讨论
  • 1. RA对SK-N-SH细胞分化的诱导效果
  • 1.1 RA对SK-N-SH细胞增殖和细胞周期进程的影响
  • 1.2 RA对SK-N-SH细胞形态与超微结构的影响
  • 1.3 RA对SK-N-SH细胞癌基因和抑癌基因表达的影响
  • 1.4 RA对SK-N-SH细胞分化标志物表达的影响
  • 2. RA诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分化过程中蛋白表达变化
  • 3. 差异表达蛋白在人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞诱导分化过程中的作用
  • 4. RA诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分化的作用机制
  • 结论
  • 参考文献
  • 图版说明
  • 致谢

    • 相关论文文献

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