HIV-1 Tat蛋白对HSV-2激活KSHV裂解性周期复制的影响

论文摘要

卡波济肉瘤（Kaposi’s sarcoma,KS）是获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）患者晚期发生率最高的恶性肿瘤。既往研究证实,其病原卡波济肉瘤相关疱疹病毒（Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV）不能独立引发KS,还需要协同因子的参与。然而促使KSHV引发KS的因素目前还未完全清楚。已经证明,人类单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus 1,HSV-1）、人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）、人类疱疹病毒6型（human herpesvirus 6,HHV-6）和人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus type 1,HIV-1）反式激活蛋白（transactivative transcription protein,Tat）是激活KSHV裂解性周期复制的重要协同因子。鉴于HIV-1血清阳性人群中人类单纯疱疹病毒2型（human herpes simplex virus-2,HSV-2）阳性率远高于HIV-1阴性人群,HSV-2与HIV-1之间密切相关,本研究我们进一步探讨了HSV-2影响KSHV复制的潜能以及HIV-1 Tat对该过程的影响。实验首先将HSV-2标准株333感染原发性渗出性淋巴瘤【primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔渗出性淋巴瘤（bodycavity-based lymphoma,BCBL）】来源的BCBL-1细胞,Western blot结果显示,HSV-2感染BCBL-1细胞72 h后HSV-2型特异性糖蛋白G-2（glycoprotein G-2,gG-2）开始稳定表达。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-timePCR）检测结果表明,HSV-2感染可以诱导KSHV ORF50（KSHV周期复制的开关基因）、ORF26（编码KSHV次要衣壳蛋白）和ORF29（编码KSHV包装相关蛋白）mRNA转录水平升高。与对照组比较,HSV-2感染组3、6、12、24、48、72和96 h ORF50 mRNA水平分别升高了9.92、2.55、227、31.6、6.6、75和3.02倍（P＜0.05）。类似地,ORF26 mRNA表达水平在3～96 h也呈现不同程度的升高,而ORF29 mRNA表达水平的升高集中在48～96 h。免疫荧光测定（immunofluorescence assay,IFA）结果显示,HSV-2感染BCBL-1同时还可诱导KSHV裂解周期蛋白的表达。虫荧光素酶报告实验验证了HSV-2对ORF50启动子的直接激活作用。进一步将HIV-1 Tat质粒转染HSV-2感染的BCBL-1细胞,采用Real-time PCR和Western blot分别检测KSHV ORF26 mRNA转录和病毒白细胞介素6（Viral Interleukin-6,vIL-6）的表达。与单纯HSV-2感染比较,KSHV ORF26 mRNA转录水平在6、24、48和72 h分别升高了3.92、1.67、2.74和1.82倍（P＜0.05）,vIL-6表达水平在6～72 h同样有不同程度的升高。虫荧光素酶报告实验显示,Tat可以增强HSV-2激活KSHV ORF 50启动子活性。以上结果提示,HSV-2可能通过诱导KSHV复制来提高病毒载量从而参与KS的致病过程;HIV-1 Tat能够增强HSV-2对KSHV的激活作用。

论文目录

• 常用中英文对照
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 HSV-2对 KSHV裂解性周期复制的影响
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 HIV-1 Tat对 HSV-2激活 KSHV裂解性周期复制影响的初探
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附录1 试剂
• 附录2 实验方法
• 致谢
• 综述