论文摘要
目的：Ca2+是细胞中已知的第二讯息传递因子,细胞中Ca2+浓度会影响细胞增生、移动和基因表达等。STIM1是位于内质网膜上的Ca2+感测蛋白,能感知内质网中Ca2+的浓度变化,激活钙池操纵钙离子通道,引起细胞外Ca2+内流。前期研究认为,STIM1与多种细胞的增殖密切相关。本研究拟通过研究STIM1在NSCLC发生中的可能作用及机制,为进一步研究NSCLC可能的发病机理提供科学依据。方法：●Western blotting验证STIM1在人源NSCLC细胞株：肺腺癌细胞株H522、 H2405、H2342、A549、SPC-A-1,肺鳞癌细胞株SW900、H1869、 SK-MES-1,大细胞肺癌细胞株H1299、H66、H1581中的表达情况；●以A549细胞株为研究对象,利用慢病毒载体系统构建STIM1-shRNA干扰载体,通过RT-PCR及Western blotting验证感染后STIM1的mRNA及蛋白表达水平；●A549细胞阻断／不阻断STIM1,采用MTS细胞增殖实验,细胞生长曲线,流式细胞周期检测对比研究STIM1与NSCLC细胞恶性增殖的生物学行为的关系；SPF级BALB/c裸鼠皮下注射阻断/不阻断STIM1的A549细胞,对比观察体内成瘤及瘤体生长情况；采用免疫组织化学SP法研究NSCLC及肺部良性病变病理组织石蜡切片中STIM1的表达情况,并分析STIM1表达与NSCLC各临床病理参数之间的关系；阻断/不阻断A549细胞STIM1后,利用RT-PCR检测周期相关蛋白的RNA表达差异,以期寻找STIM1下游相关靶基因。结果：●Western blotting结果显示：STIM1在人肺腺癌细胞株H522、H2405、 H2342、A549、SPC-A-1,人肺鳞癌细胞株SW900、H1869、SK-MES-1及人大细胞肺癌细胞株H1299、H661、 H1581中均有表达；●STIM1-shRNA慢病毒干扰载体感染A549细胞系后,RT-PCR、Western blotting检测结果显示内源性STIM1表达被抑制；阻断内源性STIM1表达后,MTS细胞增殖实验及细胞生长曲线结果提示细胞增殖能力减弱（p<0.05）；流式细胞周期结果显示细胞周期发生G1期阻滞（p<0.05）；免疫组化结果显示：STIM1在人体NSCLC石蜡切片中的阳性表达率79.83%（281/352）明显高于肺部良性病变石蜡切片中的表达率18.72%（35/187）（p<0.05）；且在NSCLC中,STIM1在肺鳞癌中的表达高于肺腺癌（p<0.05）；与其他临床病理参数无明显相关性。SPF级BALB/c裸鼠成瘤实验显示STIM1阻断组肿瘤体积明显小于未阻断组（p<0.05）●RT-PCR检测下游增殖相关蛋白的RNA显示STIM1阻断组CDK2、CDK3、CDK9、cyclingD3的表达低于未阻断组。结论：STIM1的异常表达可能与NSCLC发生密切相关。
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