款冬花多糖提取及分离纯化工艺研究

论文摘要

款冬花系菊科植物款冬的干燥花蕾,是我国传统的中草药,在医疗单位处方和民间验方、偏方等也多采用款冬花治疗急慢性气管炎、肺结核等症。多糖具有抗氧化性、抗肿瘤、抗病毒、抗溃疡、抗突变、降血脂、降血糖等作用,在医药领域应用广泛。本课题以陕南中药材款冬花为研究对象,重点对款冬花多糖的提取和款冬花多糖脱蛋白、脱色纯化工艺进行了研究,并对其抗氧化活性以及结构鉴定进行了初步的探索。主要研究成果如下：（1）款冬花多糖的优化提取工艺通过对不同提取方法的对比研究,得到了一条原料预浸泡-超声-水提法组合工艺从款冬花中提取多糖的优化路线,在单因素试验的基础上,通过响应面分析法得到了该工艺路线的的最佳工艺条件：料液比1：10 g／mL,预浸泡时间5h,温度71℃,超声时间33min,水提时间1.5h,多糖提取率达到19.48%。（2）款冬花多糖脱蛋白工艺通过对盐酸法、三氯乙酸法、Sevage法、胰蛋白酶-Sevage法和木瓜蛋白酶-Sevage法等5种脱除蛋白方法的对比研究,结果表明木瓜蛋白酶-Sevage法最为理想,该法的最佳工艺条件为：木瓜蛋白酶的酶底比为1%,pH值7.0,先在50℃水浴中酶解2h,再经Sevage法脱蛋白3次,其蛋白脱除率为88.95%,多糖保留率为92.63%。（3）款冬花多糖脱色工艺通过对双氧水氧化法、活性炭吸附法、反胶束溶液法和大孔树脂吸附法等4种方法的研究,结果表明大孔树脂吸附法对款冬花多糖的脱色效果最为理想,同时也能脱除部分蛋白质。通过对6种吸附树脂研究表明,LS-206树脂最为理想,该法最佳吸附工艺条件为：流速1BV／h,上样量为1.5BV,上样浓度为6mg／mL。经大孔树脂脱色后的脱色率可达94.20%,多糖保留率为73.03%。经过脱蛋白工艺及脱色处理后,蛋白质总去除率可达97.40%。（4）款冬花多糖的抗氧化性试验结果表明,款冬花多糖能有效的清除超氧自由基、羟自由基、亚硝基和DPPH这四种自由基,尤以对亚硝基、DPPH自由基有着明显的清除作用,且超声辅助提取多糖清除作用略优于水提多糖,且随着对多糖的不断纯化,其清除率也不断提高。（5）结构初步解析对款冬花超声提取多糖纯化组分进行了一级结构初步解析,采用凝胶渗透色谱法得出其分子量约为169800Dal；经气相色谱分析单糖组成为甘露糖和半乳糖,摩尔比约为：1.83：1。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 款冬花资源概况
• 1.1.1 款冬花形态特征
• 1.1.2 款冬花的市场应用
• 1.1.3 款冬花中药化学成分
• 1.2 多糖的研究现状
• 1.2.1 多糖的分类
• 1.2.2 多糖的化学组成与结构
• 1.2.3 多糖的应用
• 1.3 多糖的提取方法
• 1.3.1 水提法
• 1.3.2 弱酸提取法
• 1.3.3 弱碱提取法
• 1.3.4 酶提取法
• 1.3.5 超声辅助提取法
• 1.3.6 微波辅助提取法
• 1.3.7 超临界流体萃取法
• 1.4 多糖的含量测定方法
• 1.5 研究目的和意义
• 第二章 款冬花多糖的提取工艺研究
• 2.1 试验试剂与仪器
• 2.1.1 试验仪器
• 2.1.2 试验试剂
• 2.2 分析方法
• 2.2.1 多糖的测定方法——苯酚-硫酸法
• 2.2.2 多糖提取率的测定
• 2.3 款冬花多糖提取工艺路线研究
• 2.3.1 试验原料预处理
• 2.3.2 款冬花多糖提取工艺选择
• 2.4 预浸泡-超声-水提法提取工艺过程优化研究
• 2.4.1 单因素试验
• 2.4.2 响应面分析法优化款冬花多糖提取试验
• 2.5 小结
• 第三章 款冬花多糖脱蛋白工艺研究
• 3.1 试验试剂与仪器
• 3.1.1 试验试剂
• 3.1.2 试验仪器
• 3.2 分析方法
• 3.2.1 蛋白含量的测定-考马斯亮蓝法
• 3.2.2 款冬花多糖含量的测定及多糖保留率计算
• 3.2.3 款冬花多糖蛋白质含量的测定及蛋白脱除率计算
• 3.3 几种款冬花多糖脱蛋白工艺对比
• 3.3.1 盐酸法
• 3.3.2 三氯乙酸（TCA）法除蛋白
• 3.3.3 Sevage法除蛋白
• 3.3.4 胰蛋白酶-Sevage法
• 3.3.5 木瓜蛋白酶-Sevage法
• 3.3.6 不同方法脱除款冬花粗多糖蛋白试验结果
• 3.4 木瓜蛋白酶-SEVAGE法脱蛋白工艺条件的优化研究
• 3.4.1 单因素试验研究
• 3.4.2 正交试验
• 3.4.3 优化工艺重复验证试验
• 3.5 小结
• 第四章 款冬花多糖的脱色工艺研究
• 4.1 试验试剂与仪器
• 4.2 分析方法
• 4.2.1 色素含量的测定及脱色率的计算
• 4.2.2 多糖含量的测定和多糖保留率的计算
• 4.2.3 蛋白质含量的测定和蛋白去除率的计算
• 4.3 款冬花多糖脱色方法选择
• 4.3.1 双氧水氧化法脱色
• 4.3.2 活性炭法脱色
• 4.3.3 反胶束溶液脱色
• 4.3.4 大孔吸附树脂法脱色
• 4.3.5 不同脱色方法的比较
• 4.4 大孔树脂吸附法脱色工艺条件的优化研究
• 4.4.1 大孔树脂的预处理
• 4.4.2 静态吸附法优选树脂
• 4.4.3 流速对脱色效果的影响
• 4.4.4 上样量对脱色效果的影响
• 4.4.5 浓度对脱色效果的影响
• 4.5 小结
• 第五章 款冬花多糖的抗氧化性研究及初步结构分析
• 5.1 试剂与仪器
• 5.2 款冬花多糖抗氧化性研究
• 5.2.1 试验方法
• 5.2.2 款冬花抗氧化试验结果与分析
• 5.3 多糖初步结构分析
• 5.3.1 纯度鉴定
• 5.3.2 分子量测定
• 5.3.3 多糖的组成单糖分析
• 5.4 小结
• 第六章 结论
• 6.1 研究成果
• 6.2 创新点
• 6.3 设想与建议
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间取得的科研成果
• 致谢