论文题目: 炙甘草汤含药血清对兔离体心肌细胞电生理的影响
论文类型: 博士论文
论文专业: 中医临床基础
作者: 周承志
导师: 邱明义
关键词: 炙甘草汤,甘草次酸,血清药理学,反相高效液相色谱,膜片钳,离子通道,动作电位,型通道电流,瞬间外向钾电流,通道电流,电生理
文献来源: 湖北中医学院
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:用血清药理学的方法研究炙甘草汤含药血清对兔心肌细胞电生理的影响。 方法:（1）炙甘草汤含药血清的制备:炙甘草汤总提取物按《伤寒论》原方比例,传统工艺煎煮,浓缩至2.25g/ml。动物用成年雄性日本大耳白兔,随机分为空白血清组、含药血清组。含药血清组给药剂量:按人与兔体表面积比换算,给药剂量为其等效剂量的5倍。每同剂量分2次灌胃,连续5天,末次给药后1h、1.5h、2h、3h,颈总动脉无菌取血,不加抗凝剂,室温下凝固30min,2500rp/min离心20min分离血清。空白血清组以等体积生理盐水灌胃,每日2次,连续5天,末次灌胃后1.5h取血,分离血清。含药血清和空白血清均用56℃水浴30min灭活,-20℃保存。（2）炙甘草汤含药血清中GA的定量检测:以甘草次酸标准品为对照品,血浆样品的预处理为经典的甲醇去蛋白方法,以反相高效液相色谱检测,色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Hypersil BDS C18 5μm 4.6×200mm);甲醇:水:冰醋酸（85:14:1）为流动相;检测波长为250nm,理论板数按甘草次酸峰计算不低于2000。（3）空白血清对兔心室肌细胞APD的影响:以酶解法分离单个心室肌细胞,进行膜片钳全细胞记录,实验分为对照组、及5%、10%、20%、40%空白血清组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度空白血清的细胞外液进行灌流,检测各组对APD的影响。（4）炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞APD的影响:进行单个心室肌细胞的分离和膜片钳全细胞记录,实验分为对照组、空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度血清的细胞外液进行灌流,检测各组对APD的影响。（5）炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞ICa-L的影响:进行单个心室肌细胞的分离和膜片钳全细胞记录,实验分为对照组、空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组、维拉帕米血清组、维拉帕米组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度血清或药物的细胞外液进行灌流,检测各组对ICa-L的影响。（6）炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞Ito的影响:进行单个心室肌细胞的分离和膜片钳全细胞记录,实验分为对照组、空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度血清的细胞外液进行灌流,检测各组对Ito的影响,并在将含药血清洗脱后再次观察。（7）炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞INa的影响:进行单个心室肌细胞的分离和膜片钳全细胞记录,实验分为对照组、空白血清组及5%、10%、20%、40%含药血清组,分别以普通细胞外液及加入上述浓度血清的细胞外液进行灌流,检测各组对INa的影响。 结果:（1）炙甘草汤含药血清中GA的定量检测:空白血清对本检测法无干扰,各组含药血清中均可检出GA,其中以1.5h取血血清中GA含量最高。（2）空白血清对兔心室肌细胞APD的影响:各组空白血清对兔心室肌细胞APD均无明显影响。（3）炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞APD的影响:含药血清各组对APA均无明显影响,但可延长APD,5%、10%、20%、40%含药血清分别将APD50从（198.8±35.9）ms延长至（352.7±39.2）ms、（430.1±28.8）ms、（521.2±35.3）ms、（539.3±26.8）ms,将APD90从（340.1±32.9）ms延长至（447.1±26.8）ms、（526.0±39.4）ms、（595.7±53.3）ms、（624.3±54.0）ms。（4）炙炙1「草汤含药血济对兔离体心肌细胞电生理的彰响博l学位论文甘草汤含药血清对兔心室肌细胞Ica-L的影响:含药血清各组均可抑制IcaL,5%、10%、20%、40%含药血清分别将Iea-L峰值从（9.4士1 .0）PA/PF降至（7.8士1 .0）PA/PF、（6.7士0.7）PA/PF、（5.6士0.9）PA/PF、（5.7士1.1）PA/PF,维拉帕米组、维拉帕米血清组与20%、40%含药血清组相比,无显著性差异（P>0.05）。（5）炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞It。的影响:含药血清各组可抑制It。,5%、10%、20%、40%含药血清分别将Ito峰值从（16.1士1.4）R叼PF降至（13.9士1.5）PA/PF、 （11.8士1.9）PA/PF、（8.3士1.5）R叼PF、（8.2士1.2）PA用F,洗脱后其作用可消除。（6）炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞IN。的影响:含药血清各组对IN。均无明显影响。 结论:（l）炙甘草汤口服后的血药浓度达峰时间约为1,5小时左右,此后即逐步下降。（2）炙甘草汤含药血清可延长APD,可抑制IcaL,可抑制Ito,且呈浓度依赖性作用增强,对INa均无明显影响。炙甘草汤含药血清可作用于心律失常的多个靶点,这可能就是炙甘草汤抗心律失常作用的机理。关键词:@炙甘草汤反相高效液相色谱动作电位Na+通道电流甘草次酸血清药理学膜片钳离子通道L型C扩+通道电流瞬间外向钾电流电生理
论文目录:
英文缩写词表
中文摘要
ABSTRACT(英文摘要)
前言
第一部分 实验研究
一、炙甘草汤含药血清的制备
1 动物及分组
2 药物
3 血清制备
4 讨论
5 参考文献
二、炙甘草汤含药血清中GA的定量检测
1 仪器与试药
2 实验方法
3 数据统计
4 结果
5 讨论
6 参考文献
三、空白血清对兔心室肌细胞APD的影响
1 动物
2 仪器
3 溶液和试剂
4 分组
5 实验方法
6 数据统计
7 结果
8 讨论
9 参考文献
四、炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞APD的影响
1 仪器
2 溶液和试剂
3 分组
4 实验方法
5 数据统计
6 结果
7 讨论
8 参考文献
五、炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞I_(Ca-L)的影响
1 仪器
2 溶液和试剂
3 分组
4 实验方法
5 数据统计
6 结果
7 讨论
8 参考文献
六、炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞Ito的影响
1 仪器
2 溶液和试剂
3 分组
4 实验方法
5 数据统计
6 结果
7 讨论
8 参考文献
七、炙甘草汤含药血清对兔心室肌细胞I_(Na)的影响
1 仪器
2 溶液和试剂
3 分组
4 实验方法
5 数据统计
6 结果
7 讨论
8 参考文献
第二部分 结论与探讨
1 现代医学对心律失常的认识
2 中医对对心律失常的认识
3 炙甘草汤抗心律失常作用机理
4 本课题创新点
5 研究展望
第三部分 综述
1 中医药抗心律失常研究进展
2 炙甘草汤抗心律失常的临床应用进展
致谢
附图
发布时间: 2005-06-22
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