论文摘要
胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors,简称IGFs）,又称类胰岛素样生长因子,是一类多功能细胞增殖调控因子。胰岛素样生长因子系统由IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ、Ⅰ型和Ⅱ型胰岛素样生长因子受体（insulin-like growthfactor receptor,IGFR）以及与IGF特异性结合的胰岛素样生长因子结合蛋白（insulin like growth factor binding protein,IGFBP）家族组成,在正常细胞增生和恶性转化过程中发挥重要作用。而胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）是IGF的运输和储存形式,IGF通常与结合蛋白一起产生和分泌,因而IGFBP对于调节游离IGF的浓度及其与受体的结合起着重要作用。在已发现的10种胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP1-10）中IGFBP-4是分子量最小的,是一个细胞增殖抑制因子,最初是从人的成骨细胞的条件培养液中分离纯化出来的,IGFBP-4主要作用有:调节IGF的作用、在特定的细胞基质中储存IGF、不依赖IGF而发挥作用。为了获取大量的高纯度的IGFBP-4、降低其生产成本、研究其蛋白功能和体内IGFBP-4的调控机制奠定基础。采用基因重组表达是获得大量目的蛋白的主要途径,本研究将用化学合成法合成IGFBP-4基因片段,通过PCR对其进行扩增,并构建载体与该目的基因相连接,插入pGEX-6p-1融合蛋白表达载体中,构建重组质粒pGEX/-6p-1-IGFBP-4。经转化宿主菌BL21,筛选高效率转化子,摇瓶培养,将所构建的IGFBP-4表达质粒,经IPTG（isopropyl-l-thio-beta-D-galactoside）诱导表达,收集细胞裂解、SDS-PAGE电泳检测结果表明,IGFBP-4成功获得表达。进一步对诱导时间、诱导温度和培养基pH值进行优化,通过SDS-PAGE检测确定了最适表达条件为16℃,pH9.5,20h,0.2mM IPTG,此条件下上清目的蛋白的表达总量最高,表明IGFBP-4在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达。得到的融合蛋白可以经亲和层析进行分离纯化。
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标签：胰岛素样生长因子结合蛋白论文; 诱导表达论文; 蛋白纯化论文;