“Cocktail”探针药物法评价辣椒素对大鼠CYP450亚型的影响

论文摘要

评价辣椒素在体内外对大鼠CYP450亚型CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A4的诱导或抑制作用,为临床评估和正确处理辛辣食物与药物间相互作用提供依据。本文采用“Cocktail”探针药物法,研究辣椒素对大鼠CYP450亚型CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A4活性的影响,分为体外试验和体内试验两部分。体外试验中采用非那西丁、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和睾酮分别作为CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A4的探针药物,并建立同时测定肝微粒体中探针药物及其代谢产物含量的HPLC分析方法。以固相萃取法提取待测物。采用C18色谱柱和梯度洗脱进行色谱分离,八种待测物在各自线性范围内线性关系良好（r≥0.9992）,低、中、高三种浓度的日内、日间精密度≤10.44 %,平均相对回收率均在86.15%105.56%之间,平均提取回收率均在79.86%88.62%之间。结果表明该方法快速、准确,可用于肝微粒中探针药物非那西丁、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、睾酮及其代谢产物的含量测定。体外孵育试验分为试验组和对照组,试验组采用大鼠肝微粒体孵育体系、探针药物和辣椒素（对照组仅加入缓冲液）共同孵育20 min,反应终止后用上述HPLC方法检测代谢产物的生成量以代表酶的活性,以对照组酶活性为100%,计算试验组四种亚型相对活性百分比。结果表明CYP450四种亚型的相对活性百分比随辣椒素浓度增加而逐渐降低。采用Graphpad prism 5.0计算辣椒素对各亚型的IC50值,评价辣椒素在体外对四种亚型的抑制作用。结果显示辣椒素对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A4的IC50值分别为36.21、17.19、51.64和18.86μmol·L-1,表明辣椒素在体外可抑制大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C11和CYP3A4的活性,对CYP2E1的抑制作用较弱。将辣椒素与大鼠肝微粒体分别预孵育0、5、10、15、20、30 min,以预孵育0 min时的酶活性为100%,计算不同预孵育时间下各亚型的相对活性百分比,考察辣椒素对CYP450是否为机理性抑制作用。结果发现辣椒素对CYP450未呈现预孵育时间依赖性的抑制作用。依据体外实验结果,体内试验中选择CYP1A2、CYP2C11和CYP3A4三种亚型,分别采用咖啡因、甲苯磺丁脲和氨苯砜作为探针药物,建立同时测定血浆中三种探针药物含量的HPLC方法。以液液萃取法提取待测物。采用C18色谱柱和梯度洗脱进行色谱分离,三种待测物在各自线性范围内线性关系良好（r≥0.9960）,低、中、高三种浓度日内、日间精密度≤11.54%,平均相对回收率均在92.84%108.93%之间,平均提取回收率均在67.59%84.79%之间。结果表明该方法快速、准确,可用于血浆样品中探针药物咖啡因、甲苯磺丁脲和氨苯砜的含量测定。体内试验采用SD雄性大鼠,分为试验组和对照组,试验组每日清晨按25 mg·kg-1的剂量灌胃给予辣椒素溶液;空白组每日清晨按2 mL·kg-1的剂量给予空白溶剂,均连续给药7天。给药期间对大鼠进行正常喂养。第7天晨灌胃后30 min,腹腔注射“Cocktail”探针药物,均按照10 mg·kg-1的剂量给药。于给药后0.17、0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、12、24 h断尾采血,以上述HPLC法测定血药浓度。经DAS 2.1.1计算探针药物的药代动力学参数,通过对比试验组和对照组的药动学参数,评价辣椒素在体内对大鼠CYP1A2、CYP2C11和CYP3A4的影响。结果表明辣椒素可显著缩短咖啡因的T1/2,降低AUC0-t和AUC0-∞,显著增加其CL,对Cmax和Tmax无显著影响;可显著降低甲苯磺丁脲的AUC0-t和AUC0-∞,显著增加其CL,对T1/2、Cmax和Tmax无显著影响;可显著降低氨苯砜的AUC0-t和AUC0-∞,显著增加其CL,对T1/2、Cmax和Tmax无显著影响。综合上述试验结果,辣椒素在体外对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2C11和CYP3A4具有一定的抑制作用,对CYP2E1的抑制作用很弱。辣椒素在体内对大鼠CYP1A2、CYP2C11和CYP3A4均有显著的诱导作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 体外试验评价辣椒素对大鼠CYP450 不同亚型活性的影响
• 第一节 大鼠肝微粒中四种探针药物及其代谢产物的测定方法
• 1 试验材料
• 2 试验方法
• 3 小结
• 4 讨论
• 第二节 辣椒素在体外对大鼠CYP450 不同亚型活性的影响
• 1 试验材料
• 2 试验方法
• 3 小结
• 4 讨论
• 第二部分 体内试验评价辣椒素对大鼠CYP450 不同亚型活性的影响
• 1 试验材料
• 2 试验方法
• 3 试验结果
• 4 小结
• 5 讨论
• 第三部分 总结和展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢