AM真菌和类黄酮与紫穗槐的互作及DDRT-PCR筛选特异片段体系建立

论文摘要

丛枝菌根（arbuscular mycorrhiza, AM）对植物具有广泛的侵染性,世界上大约80%以上的有花植物以及蕨类和苔藓植物都具有丛枝菌根。在大部分植物中丛枝菌根都被证明能够促进植物对矿物质元素的吸收和利用,改善植物营养状况,增强植物的抗逆性,提高植物的产量和质量,加快移栽苗成活速度等方面具有积极的促进作用。目前,关于共生体识别信号研究是国际上研究植物-微生物共生现象的热点关于共生体初始识别信号研究主要集中在根瘤菌与宿主植物之间的相互识别,而对菌根共生体的相互识别信号还只是推断,并且宿主植物都是以草本豆科植物为试材。本试验通过对木本豆科植物紫穗槐接种AM真菌,并同时采用类黄酮物质刺激接种了AM真菌的紫穗槐等苗木培养,定期观察侵染率的情况及各种生长量的变化,得出AM真菌对于木本豆科植物紫穗槐的生长有明显的促进作用,侵染率达到90%左右;接种了AM真菌的紫穗槐茎高﹑根长和鲜重比未接种紫穗槐的平均高出2cm﹑2cm和0.1g;类黄酮物质对接种AM真菌的紫穗槐样品也有着相同的促进作用。不同浓度的类黄酮物质对接种AM真菌的紫穗槐而且,随着类黄酮浓度的增加,促进作用也越加的明显,茎高﹑根长和鲜重都增加了4cm﹑4cm和0.1g;表明类黄酮物质在AM真菌侵染木本豆科植物紫穗槐的过程中具有信号物质的功能。本试验采用mRNA差异显示技术分离紫穗槐与AM真菌接种木本豆科植物紫穗槐两组对照间的特异基因片段,利用分子生物学方法检测与相关信号物质有关的基因,通过试验分离出了3条特异性条带。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 菌根概述
• 1.2 丛枝菌根真菌概述
• 1.3 AM 真菌的生理功能
• 1.3.1 AM 真菌与宿主植物C﹑N﹑P 之间的关系
• 1.3.2 AM 真菌促进宿主对矿质元素吸收
• 1.3.3 AM 真菌促进植物生长发育及产量品质
• 1.4 AM 真菌增强植物的抗逆性
• 1.4.1 AM 真菌增强植物的抗旱性
• 1.4.2 AM 真菌增强植物抗低温性
• 1.4.3 AM 真菌增强植物的抗盐性
• 1.4.4 AM 真菌增强植物的抗重金属离子性
• 1.4.5 AM 可提高植物的抗、耐病力
• 1.5 紫穗槐概述
• 1.6 AM 真菌与植物共生信号概述
• 1.6.1 AM 真菌、豆科宿主和根瘤菌的关系
• 1.6.2 AM 真菌与宿主植物间信号物质——类黄酮
• 1.7 mRNA 差异显示
• 1.7.1 mRNA 差别显示技术的基本原理
• 1.7.2 mRNA 差别显示技术的优缺点
• 1.8 试验目的与意义
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 试剂盒
• 2.1.4 生化试剂及溶液配制
• 2.1.5 主要仪器
• 2.1.6 引物
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 苗木培养
• 2.2.2 不同处理样品的生物量及侵染率的测定
• 2.2.3 DDRT-PCR 体系的建立
• 2.2.4 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异片段
• 第3章 结果与分析
• 3.1 AM﹑类黄酮标准品溶液处理紫穗槐
• 3.1.1 AM﹑类黄酮标准品溶液处理紫穗槐对紫穗槐茎高的影响
• 3.1.2 AM﹑类黄酮标准品溶液处理紫穗槐对紫穗槐根长的影响
• 3.1.3 AM﹑类黄酮标准品溶液处理紫穗槐对紫穗槐鲜重的影响
• 3.1.4 AM﹑类黄酮标准品溶液处理紫穗槐对侵染率的影响
• 3.2 DDRT-PCR 体系的建立
• 3.2.1 提取样品的总RNA
• 3.2.2 总RNA 纯化
• 3.2.3 总RNA 反转录成c-DNA 的琼脂糖凝胶检测
• 3.2.4 PCR 检测
• 3.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测
• 第4章 讨论
• 4.1 AM 真菌对紫穗槐的影响
• 4.2 类黄酮物质对AM 真菌接种紫穗槐的影响
• 4.3 本试验采用DDRT-PCR 技术的特点
• 4.4 mRNA 差异显示试验过程中的探究
• 4.4.1 影响总RNA 提取的因素
• 4.4.2 总RNA 反转录成cDNA 的影响因素
• 4.4.3 影响PCR 的因素
• 4.4.4 影响聚丙烯凝胶酰胺的因素
• 4.5 后续试验与展望
• 结论
• 参考文献
• 致谢