论文摘要
本文以过山枫为原材料,采用天然药物化学方法,对其有效部位进行活性研究,主要研究内容为:建立过山枫中总黄酮和总三萜相应含量的测定方法;过山枫总黄酮的抗氧化性研究;过山枫总三萜的纯化工艺;过山枫不同极性部位活性筛选。1过山枫总黄酮的提取:称取粉碎后的过山枫粉末20g,按1:10(g/m1)料液比加入70%乙醇溶液,冷凝回流提取2h,过滤,滤渣按上述操作重复提取2次(各1h),合并滤液,用95%乙醇定容至一定体积。2总黄酮含量测定:以芦丁为标准品,采用紫外分光光度法测定过山枫总黄酮。芦丁在20-60μg/ml内与其吸光度呈良好的线性关系,线性回归方程为y=0.0128x-0.0266,R2=0.9991。此法简单、快捷、准确,可以用于测定过山枫总黄酮的含量。3总黄酮提取物抗氧化性研究:结果表明,过山枫总黄酮对DPPH自由基ABTS自由基、OH自由基均具较强的清除或抑制效果。在供试浓度范围内,过山枫总黄酮对上述三种自由基的清除或抑制效率与总黄酮浓度间呈现一定量效关系,当过山枫总黄酮浓度达18.15μg/ml、11μg/ml、18.15μg/ml时,其对DPPH·、ABTS+与-OH的清除或抑制率分别达到87.43%、85.84%与92.56%,均高于同浓度下Vit C的清除或抑制率。以上表明过山枫总黄酮具有较强的抗氧化作用。4总三萜含量测定:以齐墩果酸为标准品,用5%香草醛-冰醋酸溶液,高氯酸显色,在560nm波长处测定样品吸收度。实验表明齐墩果酸在21-74μg/ml线性范围内,线性关系良好,其回归方程为Y=56.269x-0.0376,R2=0.9977。该方法操作简便,结果稳定,重现性好,可作为过山枫药材质量监控的有效手段。5总三萜提取、纯化工艺研究:95%的乙醇在回流温度为70℃,固液比为1:12的条件下提取2h,提取3次,在此条件下提取得到总三萜含量为3.8%。以树脂对过山枫总三萜的吸附量和解吸率为考察指标,选用HPD100HPD400和AB-8三种型号的大孔吸附树脂进行考察。结果表明,AB-8大孔树脂对过山枫总三萜物质的吸附和解吸效果最佳,吸附流速为2ml/min,吸附pH值为6.0,解吸剂为40%乙醇。AB-8大孔吸附树脂对过山枫总三萜的纯化具有较好的重复使用性能。经测定用大孔树脂纯化后的过山枫总三萜纯度可达78.39%,远远高于树脂纯化前的纯度。6过山枫不同极性部位活性筛选:过山枫不同极性部位GSF-A、GSF-B GSF-C及MTX对小鼠脾淋巴细胞增殖有显著抑制作用,各药物组抑制率与ConA对照组比较均有统计学意义(p<0.05);其中以GSF-A部位对淋巴细胞增殖抑制作用最显著。
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