论文摘要
目的初步探讨骨髓单个核细胞库姆（BMMNC-Coombs）试验（+）血细胞减少（又称免疫相关性全血细胞减少，immunorelated pancytopenia，IRP）患者骨髓造血细胞自身抗体IgG破坏和／或抑制造血机制。方法选取IRP患者为研究对象，以重型再生障碍性贫血（SAA）及正常人分别为病例及正常对照，进行下述研究：第一部分IRP患者骨髓红系造血岛（EI）形成机制。（1）采用流式细胞术（FACS）检测IRP患者骨髓细胞（CD34+、CD15+及GlycoA+细胞）膜抗体（IgG、IgM）类型；（2）采用免疫荧光（IF）法标记48例IgG（+）的IRP患者骨髓EI，观察自身抗体IgG在EI分布；（3）探讨EI自身抗体分布与IRP患者病情相关性。第二部分骨髓巨噬细胞（MΦ）数量、活化抗原表达及功能研究。（1）采用流式细胞术（FACS）检测IRP患者骨髓细胞（CD34+、CD15+及GlycoA+细胞）膜抗体（IgG、IgM）类型；（2）采用FACS检测61例IgG（+）IRP患者骨髓MΦ数量[（CD68+／CD45+）％]、活化抗原（CD69）表达水平[（CD68+CD69+／CD68+）％]；（3）采用鸡红细胞（CRBC）吞噬试验评价骨髓MΦ吞噬率和吞噬指数。第三部分骨髓造血细胞膜功能受体封闭研究。FACS检测骨髓GlycoA（+）细胞膜EPO受体（EPOR）和自身抗体IgG；在含不同浓度EPO的培养基中培养骨髓干祖细胞，7天检测红系集落（CFU-E）产率。结果第一部分（1）48例IRP患者中有14例（29．17％）骨髓“EI”的IF阳性，即EI中巨噬细胞和幼红细胞间沉积自身抗体IgG。（2）这14例患者骨髓GlycoA（+）细胞膜上均（100％）测及自身抗体IgG，贫血是首发症状，以重度贫血为主[重度贫血9例（64．29％），中度贫血5例（35．71％）]；余34例未测及EI中有自身抗体IgG沉积者仅2例（5．89％），其贫血程度轻。（3）14例EI有自身抗体IgG沉积患者的网织红细胞比例[（2．0±0．8）％]、胸骨红系比例[（44．1±13．9）％]及间接胆红素水平[（9．4±4．7）mmol／1]均明显高于EI中无IgG沉积者[（1．3±1．0）％，（29．8±8．2）％，（6．6±6．7）mmol／l]（P＜0．05），而前者的血红蛋白水平[（59．6±16．2）g／l]低于后者[（83．4±25．0）g／l]（P＜0．05）。（4）EI有自身抗体IgG沉积患者3、6个月总有效率（57．14％、85．71％）优于EI无自身抗体IgG沉积患者（P＜0．05）（32．26％、61．29％）。第二部分61例IRP患者骨髓MΦ数量、活化抗原表达、CRBC吞噬率及吞噬指数[（0．57±0．30）％，（40．30±18．49）％，（37．56±15．20）％和（0．75±0．34）]均高于10例SAA患者[（0．46±0．08）％，（32．44±19．37）％，（28．26±10．46）％和（0．59±0．39）]及13名正常人[（0．44±0．69）％，（29．71±11．67）％，（25．63±14．75）％和（0．55±0．16）]（P＜0．05）；且MΦ数量与活化抗原表达、吞噬率及吞噬指数均呈正相关（r=0．89，p＜0．01；r=0．43，p＜0．01；r=0．40，p＜0．01）。根据MΦ数量将IRP患者分为A组（MΦ≥0．5％）和B组（MΦ＜0．5％），A组34例患者中32例（94．12％）自身抗体为IgG，B组27例患者中仅2例（7．41％）自身抗体为IgG；A组患者MΦ的活化抗原表达、CRBC吞噬率及吞噬指数[（49．19±16．63）％，（46．62±13．38）％，（0．91±0．36）]显著高于B组患者[（29．11±14．30）％，（28．67±12．59）％，（0．61±0．30）]（P＜0．05），而B组患者与SAA及正常人无显著性差异（P＞0．05）。将34例BMMNC-IgG（+）型患者分为MΦ高（≥0．75％）、低水平（＜0．75％）2组，25例（73．53％）MΦ低水平患者均仅能检测到一系骨髓细胞（CD34+／或CD15+／或GlycoA+）有IgG，9例（23．53％）MΦ高水平患者有8例能检测到二系骨髓细胞有IgG，1例（2．94％）是三系骨髓细胞均有IgG；MΦ高水平的IRP患者MΦ的活化抗原表达、CRBC吞噬率及吞噬指数[（56．12±15．11）％，（60．22±12．51）％，（1．23±0．23）]显著高于MΦ低水平患者[（44．58±18．16）％，（43．32±9．24）％，（0．84±0．24）]（P＜0．05）。MΦ高水平患者外周血红细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数均显著低于MΦ低水平患者（P＜0．05）；MΦ高水平患者的网织红细胞比例、胆红素水平及胸骨红系比例均显著高于MΦ低水平患者（P＜0．05）。第三部分（1）24例骨髓GlycoA（+）细胞膜IgG（+）的IRP患者骨髓GlycoA（+）细胞膜EPOR水平[（4．16±0．15）％]显著低于10名正常人[（6．04±0．48）％]（P＜0．05）。（2）这些IRP患者骨髓细胞体外培养，CFU-E产率与EPO浓度的关系呈两种形式：EPOR低水平组1的拟合方程为：y=1．0028x-2．0056，（P＜0．05，g＜0．05），回归检验有显著性，失拟检验回归方程拟合良好，呈线性关系，提示有增长趋势；EPOR低水平组2数据行拟和检验结果：F=0．25，P=0．6264，g=0．16，为非线性关系，无增长变化趋势；正常人拟合方程为：y=0．68915x-1．9783（P＜0．05，g＜0．05），回归检验有显著性，失拟检验回归方程拟合良好，呈线性关系，提示有增长趋势。结论IRP患者自身抗体IgG抑制和／或破坏骨髓造血的机制可能是：（1）激活MΦ吞噬和破坏带有自身抗体IgG的骨髓造血细胞导致骨髓造血功能衰竭；（2）部分自身抗体IgG通过与骨髓造血细胞膜功能抗原（如EPOR）结合，使骨髓造血细胞缺乏必需造血生长因子刺激从而影响其增殖和分化。
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