论文摘要
目的(1)观察丹参注射液对大鼠急性脊髓损伤后运动功能的作用。(2)探讨丹参注射液对大鼠急性脊髓损伤后运动功能的作用机制。方法1.动物造模、分组及干预方法(1)动物造模SD雄性大鼠144只,麻醉后俯卧位固定于手术台上,消毒后以T11为中心取后正中切口,咬除T10～T12椎板和棘突,用硬塑料片保护T10和T12脊髓,只暴露T11脊髓。采用改良Alleni去致伤脊髓：以10g不锈钢杆自三维立体定向仪上经套筒自由坠落4cm,撞击Tll脊髓,然后移去不锈钢杆,打击区脊髓硬脊膜下可见充血,观察到鼠尾痉挛性摆动,双下肢及躯体痉挛收缩,示造模成功。另选取SD雄性大鼠48只作为假手术组,采用上述手术方法,不撞击脊髓。(2)分组144造模大鼠,随机分为观察组、对照组和SCI组,每组各48只,3组又各分为造模后1、3、7及14天组,每组12只。(3)干预方法观察组：于造模后1h给予丹参注射液1.78mL/kg/天,腹腔内注射,每天1次,按存活时间分别注射1、3、7、14天。对照组：采用大剂量冲击疗法,于造模后1h腹腔注射甲基强的松龙30mg/kg,45min后按5.4mg/kg/h计算23h总量,分4次腹腔注射。假手术组和SCI组：不进行任何干预。分别于手术后1天、3天、7天、14天,分组分批取材。2.实验指标检测(1)各组大鼠一般状态比较(2)行为学评分采用改良Rivlin斜板法评分来评价大鼠的脊髓功能。(3)组织病理学观察光学显微镜下观察脊髓造模后1天、3天、7天、14天的细胞结构变化。(4)原位杂交检测包括胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、乙酰胆碱转化酶(ChAT)、突触体素(synaptophysin).突触素(synapsin)、突触结合蛋白I(sytI)。3.统计学处理将所得数据用SPSS11.0版统计软件进行统计。结果1.各组大鼠一般状态比较损伤1天后,各组大鼠毛发散乱,后肢无法运动,呼吸较浅,饮食减少,尿失禁或尿潴留。损伤3天后观察组与对照组毛色散乱,后肢能轻微活动,但不能支撑爬行,SCI组后肢毛色干枯、散乱,无任何活动,均呼吸较浅、饮食减少、尿失禁或尿潴留。损伤7天后,观察组和对照组动物毛色变润泽、整齐,后肢活动增强,无法支撑爬行,呼吸正常,饮食有所增加,尿失禁或尿潴留有所改善,SCI组无明显变化。损伤14天后观察组和对照组动物毛色润泽、整齐,后肢活动增强,稍可支撑爬行,呼吸正常,饮食接近正常,排尿趋于正常,SCI组毛发散乱,后肢轻微活动,呼吸接近正常,饮食有所增加,尿失禁或尿潴留有所改善。2.行为学评分各组损伤前斜板试验临界角比较,差异无统计学意义(P>0.05)。造模后1天,观察组斜板试验临界角低于治疗前及对照组同期(P<0.01)；造模后3天,观察组斜板试验临界角与造模后1天比较,差异无统计学意义(P>0.05);造模后7天,观察组斜板试验临界角高于造模后3天及SCI组同期(P<0.01),低于对照组(P<0.05)；造模后14天,观察组斜板试验临界角高于造模后7天及SCI组同期(P<0.01,P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05)。3.组织病理学改变脊髓造模后1天,SCI组脊髓损伤灰质区明显出血、水肿,部分神经元变性坏死；观察组和对照组部分神经元坏死,但出血、水肿较轻。造模后3天,SCI组脊髓损伤灰质区仍明显出血、水肿,神经元坏死增多；观察组出血、水肿减轻,神经元坏死稍增多；对照组出血、水肿减轻,神经元坏死增多。造模后7天、14天,SCI组脊髓损伤灰质区出血、水肿减轻：观察组和对照组出血、水肿均明显减轻。4.原位杂交检测结果(1)胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达造模后1天,观察组GDNF阳性产物吸光度值低于对照组同期(P<0.05),高于SCI组同期(P<0.01)；造模后3天,高于造模后1天及SCI组同期(P<0.01,P<0.05),低于对照组同期(P<0.05)；造模后7天,与造模后3天及对照组同期无显著差异(P>0.05,P>0.05),高于SCI组同期(P<0.01)；造模后14天,与造模后7天及对照组同期无显著差异(P>0.05,P>0.05),高于SCI组同期(P<0.01)。(2)乙酰胆碱转化酶(ChAT)表达造模后1天,观察组的ChAT阳性产物吸光度值低于对照组(P<0.01),与SCI组无显著差异(P>0.05)；在造模后3天、7天的乙酰胆碱转化酶阳性产物吸光度值低于对照组(P<0.05),高于SCI组(P<0.01)；在造模后14天与对照组无显著差异(P>0.05),高于SCI组(P<0.01)。(3)突触体素(synaptophysin)表达造模后1天、3天,观察组的synaptophysin阳性产物吸光度值与对照组和SCI组无显著差异(P>0.05),在造模后7天、14天高于SCI组(P<0.01),与对照组无显著差异(P>0.05)。(4)突触素I(synapsinI)表达造模后1天、3天,观察组的synaptophysin吸光度值与对照组和SCI组无显著差异(P>0.05),在造模后7天、14天高于SCI组(P<0.01),与对照组无显著差异(P>0.05)。(5)突触结合蛋白I(synaptotagmin, SytI)表达观察组在造模后1天sytI阳性产物吸光度值与对照组和SCI组无显著差异(P>0.05)；造模后3天低于对照组(P<0.05),高于SCI组(P<0.01)；在造模后7天、14天高于SCI组(P<0.01),与对照组无显著差异(P<0.05)。结论(1)丹参注射液对急性脊髓损伤运动功能具有保护作用(2)丹参注射液对急性脊髓损伤灰质的保护机制：可能通过促进脊髓灰质突触体素、突触素Ⅰ、突触结合蛋白Ⅰ、胶质细胞源性神经营养因子、乙酰胆碱转化酶合成,加快脊髓灰质突触的功能恢复。
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