导读:本文包含了依赖性蛋白激酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:瘤背石磺,CaMKⅣ,基因克隆,实时荧光定量PCR
依赖性蛋白激酶论文文献综述
梁威,杨铁柱,沈和定,许国绿,顾冰宁[1]（2019）在《瘤背石磺钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因的克隆及组织表达》一文中研究指出钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)是一种广泛存在于真核生物中的调控因子,在生物体内具有多种生理功能。为了探究瘤背石磺中Ca MKⅣ的作用和分子机制,为进一步阐述Ca MKⅣ的生理功能提供科学的理论依据。本实验以瘤背石磺神经节为实验材料,利用RACE-PCR技术克隆得到CaMKⅣ基因的cDNA序列,并进行生物信息学分析和q RT-PCR实验。结果显示,瘤背石磺Ca MKⅣ基因的c DNA全长1 603 bp,开放阅读框为1 032bp,5′非编码区315 bp,3′非编码区256 bp,共编码343个氨基酸;预测该基因编码的多肽链原子数量是5 490,分子量约为3.87 ku,理论等电点6.12,分子式为C1741H2768N452O514S15,N端信号肽由1～29个氨基酸组成。氨基酸序列比对及系统进化树结果显示,瘤背石磺CaMKⅣ基因与加州海兔、光滑双脐螺CaMKⅣ基因的亲缘关系最为接近,其系统进化分析与传统的形态学分类相吻合。荧光定量PCR结果显示,CaMKⅣ基因在各个组织均有表达,其中在腹足的相对表达量最高,其次是背部皮肤、口器,而在神经节组织、蛋白腺、肠、肝胰腺等脏器组织的相对表达量较低,初步推测,该基因在瘤背石磺的神经调节中发挥重要作用,或为生物机体感知外界环境变量因素的分子基础。本实验为今后进一步了解瘤背石磺神经结构生理功能的调节以及与CaMKⅣ基因功能研究奠定理论支撑,也为探究海洋动物由海洋向陆地进化过程中对环境的适应机制提供参考。(本文来源于《水产学报》期刊2019年11期）
贾桂枝,王蕊,岳怡,戴红良[2]（2019）在《Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路参与氨致星形胶质细胞水肿》一文中研究指出目的明确Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路在氨诱导星形胶质细胞水肿中的作用。方法①向体外培养星形胶质细胞中分别加入磷脂酶(PLC)抑制剂U73122(1μmol/L),Ca~(2+)螯合剂BAPTA(25μmol/L)或PKC抑制剂GF109203X(3μmol/L),再以氯化铵刺激细胞12 h,以Calcein作为荧光探针检测细胞水肿情况;②向细胞中分别加入PLC抑制剂U73122或表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478(1μmol/L),再加入氯化铵,以Fura-2作为荧光探针,检测细胞内Ca~(2+)瞬时变化;③氯化铵刺激细胞20 min,免疫共沉淀法检测PLC/EGFR相互结合情况;④向细胞中加入PKC抑制剂GF109203X,再以氯化铵刺激星形胶质细胞2 h检测ERK磷酸化情况。结果①U73122、BAPTA及GF109203X预处理均可显着抑制氨诱导的星形胶质细胞水肿(均P<0.05);②U73122及AG1478显着抑制氨诱导的细胞内Ca~(2+)瞬时升高(均P<0.05);③20 min氨刺激可增加PLC与EGFR间的相互结合(P<0.05);④GF109203X显着抑制氨诱导的ERK磷酸化(P<0.05)。结论 Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路介导了氨诱导星形胶质细胞水肿的过程。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2019年16期）
郑帅,刘燕,朴春梅,刘婷婷,王吉静[3]（2019）在《巨噬细胞特异性敲除一磷酸腺苷激活依赖性蛋白激酶基因的小鼠模型构建》一文中研究指出目的:构建巨噬细胞特异性敲除一磷酸腺苷激活依赖性蛋白激酶(AMPK)基因的小鼠模型,并观察对血压的影响。方法:利用胚胎显微注射法构建AMPKα1基因第3外显子两端携带loxP位点的小鼠模型,和集落刺激因子1受体启动子诱导表达Cre酶的小鼠模型,交配繁育出巨噬细胞特异性敲除AMPK的小鼠模型。鼠尾DNA做PCR鉴定基因型,腹腔注射他莫昔芬诱导敲除AMPK,Real-time PCR检测小鼠骨髓细胞AMPK RNA水平。检测Cre阴性小鼠注射与不注射他莫昔芬的血压差异,以及Cre阴性和阳性小鼠注射他莫昔芬5d后的血压差异。结果:鼠尾DNA PCR鉴定出AMPKα1 loxP为纯合阳性、且Cre为阴性或阳性的小鼠。与Cre阴性小鼠相比,他莫昔芬显着降低了Cre阳性小鼠骨髓细胞AMPK mRNA[(0.9263±0.1293)vs.(0.47±0.04657),P<0.017]。他莫昔芬对Cre阴性小鼠血压的影响不显着[收缩压(122.9±3.183)vs.(124±6.878) mmHg,1 mmHg=0.133 kPa,P=0.427],而AMPK敲除鼠血压显着低于对照组[收缩压(123.5±3.577)vs.(107.5±4.814)mmHg,P=0.037]。结论:成功构建巨噬细胞特异性敲除AMPK的小鼠模型,证实敲除鼠血压降低。(本文来源于《心肺血管病杂志》期刊2019年07期）
雷蕾,王璐,姚丽娜,郝心愿,曾建明[4]（2019）在《茶树钙依赖性蛋白激酶基因CsCDPK17的鉴定及表达分析》一文中研究指出钙依赖型蛋白激酶(Calcium-dependentproteinkinases,CDPKs或CPKs)是植物细胞中重要的钙离子信号受体,普遍参与了植物生长发育和胁迫响应等调控过程。本研究从茶树龙井43中克隆到1条CDPK基因,经测序验证该序列包含1 611 bp的完整ORF,编码536个氨基酸。结合序列比对和进化分析发现该蛋白N-末端具有豆蔻酰化位点,具备钙依赖性蛋白激酶的保守结构域,并且与拟南芥AtCDPK17的同源关系最近,因此命名为CsCDPK17(Genbank登录号为:MK238482)。蛋白质理化特性分析发现其蛋白分子量为59.9 kD,理论等电点pI为5.43,属无跨膜结构域的亲水性蛋白。使用水稻原生质体和烟草叶片两种瞬时表达的方法均证明CsCDPK17是细胞质膜和细胞核双定位蛋白。对克隆到的CsCDPK17上游2 000 bp的启动子区分析发现了多个与基因转录、光、激素(ABA、SA、MeJA等)相关的顺式作用元件。表达分析显示,CsCDPK17在成熟叶和种子中表达水平较高,而在根中的表达水平最低;在龙井43、大面白等4个品种冷驯化过程中,该基因的表达随着冷驯化过程显着上调,随着脱驯化过程下调;同时还发现CsCDPK17能够不同程度地响应低温(最高5.1倍)、干旱(最高2.3倍)、渗透(最高2.4倍)胁迫。本研究的结果表明CsCDPK17在茶树的生长发育和低温、干旱、渗透等非生物胁迫响应的过程中均发挥一定的调控作用。(本文来源于《茶叶科学》期刊2019年03期）
盛晴宇,张泽茹,罗放[5]（2019）在《钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα对阿片诱导痛觉过敏大鼠中央杏仁核抑制性突触后电流的影响》一文中研究指出目的探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)对阿片诱导痛觉过敏(OIH)大鼠中央杏仁核(CeA)抑制性突触后电流的影响。方法实验一:取雄性SD大鼠12只,随机分为对照组和KN93组,每组右侧CeA立体定位置管恢复1周后经颈皮下注射芬太尼(60μg/kg×4次,间隔15 min)造OIH模型,随后对照组及KN93组大鼠CeA区分别注射50%DMSO 0.5μl或CaMKⅡα抑制剂KN93 10 nmol,记录给药前后大鼠机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。实验二:另取雄性SD大鼠32只,随机分为Con-1组、Con-2组、OIH-1组和OIH-2组,建模成功后制成脑片,其中Con-1组与OIH-1组用膜片钳记录CeA区神经元自发抑制性突触后电流(sIPSCs);Con-2组和OIH-2组记录CeA区神经元微小抑制性突触后电流(mIPSCs),观察加用KN93 10μmol/L前后上述电流幅值和频率的变化。结果实验一:与造模前比较,造模后两组MWT和TWL均明显降低(P<0.01);与造模后比较,给药后KN93组MWT和TWL明显升高(P<0.01)。实验二:与Con-1组比较,OIH-1组sIPSCs幅值和频率明显降低(P<0.05),给药后OIH-1组sIPSCs幅值和频率明显升高(P<0.05),但对Con-1组无明显影响;与Con-2组比较,OIH-2组mIPSCs幅值和频率亦明显降低(P<0.05),给药前后OIH-2组与Con-2组mIPSCs幅值和频率差异无统计学意义。结论 CaMKⅡα可抑制CeA区自发抑制性突触后电流,这可能是CaMKⅡα调制阿片诱导痛觉过敏的机制之一。(本文来源于《临床麻醉学杂志》期刊2019年06期）
刘淼,范平生,张腾跃,黄金,樊高飞[6]（2019）在《钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在维拉帕米逆转肺腺癌顺铂化疗耐药中的作用》一文中研究指出目的探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在维拉帕米逆转肺腺癌顺铂化疗耐药中的作用。方法在肺腺癌细胞系(A549)中,采用CCK-8法检测维拉帕米逆转顺铂耐药的能力,采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测维拉帕米逆转顺铂耐药中凋亡水平的效果,采用Western blotting检测逆转耐药过程中P-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白表达水平的变化。结果在肺腺癌细胞系(A549)中,单药顺铂组、顺铂联合维拉帕米组的细胞增长抑制率分别为(55. 00±2. 60)%、(32. 30±1. 80)%,差异有统计学意义(P <0. 05)。凋亡实验表明,单药顺铂组细胞凋亡率为10. 30%,顺铂联合维拉帕米组为21. 60%,差异有统计学意义(P <0. 05)。Western blotting结果显示,在A549细胞中,顺铂联合维拉帕米组P-CaMKⅡ/Ca MKⅡ的表达明显低于单药顺铂组。结论在肺腺癌细胞中,CaMKⅡ参与维拉帕米逆转化疗耐药的过程。(本文来源于《实用临床医药杂志》期刊2019年10期）
席凯文,耿鑫,余化霖,边慧[7]（2019）在《钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在慢性疼痛中作用的研究进展》一文中研究指出钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)是一种广泛分布于外周神经系统及中枢神经系统神经元中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。近年研究发现,脊髓背角浅层和脊髓背根神经节中Ca MKⅡ活化在神经性疼痛、炎症性疼痛和癌性骨痛等慢性疼痛发生、发展中起重要作用。抑制Ca MKⅡ活性能有效缓解慢性疼痛,Ca MKⅡ可能成为将来慢性疼痛治疗的一个重要靶点。(本文来源于《山东医药》期刊2019年11期）
刘华梅,李宗恒,刘俊才[8]（2019）在《外阴上皮内非瘤样病变女性患者细胞周期蛋白D1、周期素依赖性蛋白激酶4和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27的表达及意义》一文中研究指出目的探讨外阴上皮内非瘤样病变(NNEDV)女性患者细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、周期素依赖性蛋白激酶4(CDK4)和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27 (P27)的表达及意义,为临床诊治提供参考依据。方法采用免疫组织化学(SP)法研究NNEDV患者皮损中Cyclin D1,CDK4及P27蛋白的表达。结果①NNEDV组织的3组病理类型[外阴鳞状上皮增生(SH)组、外阴硬化性苔癣(LS)组、SH合并LS组]中Cyclin D1、CDK4蛋白阳性表达率明显高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 05),P27蛋白阳性表达率低于正常组,但差异无统计学意义(均P>0. 05);而病变的3组病理类型之间Cyclin D1、CDK4及P27蛋白阳性表达率差异无统计学意义(均P>0. 05)。②Cyclin D1和CDK4在NNEDV组中棘细胞层/基底细胞层阳性表达率的比值高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 01); P27的棘细胞层/基底细胞层阳性表达率比值在两组中差异无统计学意义(P>0. 05)。结论①Cyclin D1及CDK4蛋白的高表达可能是NNEDV发病的原因之一。②NNEDV的3种病理类型可能具有共同的或相似的发病机制。③NNEDV组织各层上皮细胞增殖不平衡说明NNEDV存在恶变的可能性。④本研究认为在NNEDV的随访中P27蛋白作为随访病变恶变的指标比Cyclin D1及CDK4的意义更大。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2019年06期）
赵东仪[9]（2019）在《钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的抑制剂KN93对大鼠海马培养神经元与PC12细胞的毒性作用与机制》一文中研究指出前言癫痫是一种大脑神经元放电异常的复杂的神经系统性疾病,发病率为0.5-1%影响着世界上7000多万病患者。癫痫具有复杂的发病机制,且其机制尚未明确。Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Calcium/Calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKII)作为Ca~(2+)/钙调蛋白(Calmodulin,CaM)调节蛋白家族中的一个主要成员,其在多种疾病的病理生理过程中发挥重要的作用。研究表明,CaMKII磷酸化活性在不同癫痫模型中下降,我们前期研究结果表明遗传性癫痫震颤大鼠(Tremor,TRM)海马中磷酸化CaMKⅡ蛋白表达下调。KN93为CaMKII特异性抑制剂,可抑制CaMKII磷酸化活性。到目前为止,KN93对神经细胞的毒性作用与机制并不清楚。电压门控钠通道(Voltage-gated sodium channel,VGSC)是常见且重要的钠通道类型之一,其由一个α亚基和多个β亚基(β_1-β_4)构成,α亚基具有10种不同的亚型(Na_V1.1-1.9,Nax),其中Na_V1.1、Na_V1.2、Na_V1.3和Na _V1.6这4种亚型在中枢神经系统中大量分布。VGSC作为启动神经元的动作电位,同时VGSC也是抗癫痫药物的主要治疗靶点。我们既往研究和他人研究表明病人癫痫脑组织和癫痫动物模型VGSC的蛋白表达上调,VGSC功能亦发生变化。同时,我们前期发现侧脑室给予KN93的自发性癫痫大鼠海马组织中磷酸化CaMKⅡ蛋白表达进一步下调,Na_V1.2蛋白表达上调,表明CaMKⅡ抑制改变VGSC的表达,可能与癫痫的发病机制或继发表现相关。到目前为止,CaMKⅡ活性抑制对神经细胞VGSC的作用仍不清楚。丝裂原活化蛋白激酶又称促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK或MAP激酶)是特定于氨基酸、丝氨酸和苏氨酸的特异性蛋白激酶。MAPK参与指导细胞对多种刺激的反应,例如有丝分裂原、渗透压、热休克和促炎细胞因子。它们调节细胞功能,包括增殖、基因表达、分化、有丝分裂细胞存活和细胞凋亡。c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)是MAPK的重要通路靶点之一,最初鉴定为激酶结合并磷酸化c-Jun的上丝氨酸其转录激活结构域内的-63和Ser-73。它们属于丝裂原活化蛋白激酶家族,并控制由细胞因子、紫外线照射、热休克和渗透压休克等原因导致的应激反应,并在细胞凋亡途径中起关键作用。研究表明哺乳动物和昆虫的炎症反应可通过两种MAP激酶激酶MKK4和MKK7进行活化,并且可以通过Ser/Thr和Tyr蛋白磷酸酶使JNK失活。本研究使用磷酸化的JNK抑制剂(p-JNK抑制剂)SP600125,我们前期研究中发现TRM海马组织p-JNK表达升高,CaMKII活性抑制后TRM海马组织p-JNK表达进一步升高,但JNK通路如何影响KN93对神经细胞的作用并不明确。因此,本研究通过细胞培养、分子生物学方法揭示KN93对大鼠原代培养神经元和PC12的作用及其机制,明确KN93对神经细胞的毒性作用及KN93诱导的毒性作用和p-JNK通路之间的关系,旨在进一步阐明癫痫的发病机制,为癫痫离子通道特异性药物的筛选提供初步的理论基础和实验依据。实验方法1.传代细胞(PC12细胞系)培养将冻存的细胞种子37℃复苏30分钟,倒入具有培养基的培养皿中,每6-12h观察细胞形态。当细胞长满培养皿时开始传代,倒出培养皿中的细胞液,缓慢倒入预热的无血清培养液清洗叁次。倒入胰酶消化3-5分钟(随时观察细胞状态),消化完全后倒入有血清培养液终止消化,并传至新的培养皿中。取长好细胞,重复细胞传代过程,消化完全后打入2 mL有血清培养液,将细胞液转移至5 mL EP管中封好,离心后取细胞沉淀与900μL牛血清马血清混悬液和100μL冻存液吹打细胞至均匀,转移至细胞冻存管,4℃30分钟,-20℃2小时,-80℃梯度冻存。2.原代海马神经元培养出生2天内新生Wistar大鼠幼崽,麻醉并断头,迅速取出大脑放入4度存放的Hank’s液中浸泡。在显微镜冰浴状态下迅速解剖海马,取用冷藏的5 mL细胞培养液(Hyclone DME/F-12)清洗海马组织叁次。使用1-2 mL果胶酶消化海马组织,轻轻吹打1-2次,取出细胞悬液将剩余组织再次使用果胶酶消化,直至消化完全。将消化后细胞与海马神经元培养液均匀混合并计数进行铺板。24小时贴壁后每隔一天半数体积换液。培养7-9天观察神经元状态后做实验。3.免疫印迹(Western Blot,WB)实验法取出提前铺好的六孔细胞培养板,每板加150μL细胞裂解液,细胞刮刀均匀刮培养板至细胞完全与裂解液混合,静置30分钟,将细胞裂解液吸取至1.5 mL EP管中,12000转20分钟4℃离心,将细胞膜细胞器等杂质离心至管底。转移上清至新的1.5 mL EP管中,测蛋白浓度。按照样品与Loading Buffer 4:1混匀后放置样品加热器中加热10分钟,使蛋白变性。制胶后进行电泳,75 V低压电泳30分钟后切换电压110 V电泳1小时。Marker电泳至玻璃板底部停止电泳,取出胶。制转膜叁明治,放入冰袋,避光湿转大分子300 mA 6个小时,小分子200 mA 90分钟。封闭后膜孵育VGSC亚基兔源一抗抗体和凋亡相关指标一抗抗体,TBST清洗叁次每次10分钟,孵育羊抗兔二抗,TBST清洗叁次每次10分钟。1:1配置ECL发光液,进行发光。4.CCK8(Cell Counting Kit 8)细胞毒性实验重复细胞传代过程,在96孔板中接种细胞悬液,每孔种5000-7000个细胞(注意混匀)。细胞贴壁后,按照0、0.1、0.3、1、3、10、30、100的浓度梯度给药24小时,终浓度体积为100μL。按1:10加入CCK-8试剂,在细胞培养箱内继续孵育2小时,用酶标仪测定在450 nm处的吸光值,如果吸光度值不达标每30分钟再测一次。CCK8细胞存活率实验通过吸光度值按照细胞存活率(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]×100%的公式进行计算。5.流式细胞术冰浴条件下,用胰酶消化细胞,终止消化后离心取细胞沉淀。取4 mL Binding buffer放入36 mL去离子水中混匀,10倍稀释Binding buffer试剂。加900μL PBS洗细胞,将悬液转移到1.5 mL的EP管中,1000转离心5分钟。离心后去除上清,加950μL Binding buffer轻轻吹打再次离心1000转5分钟,以上过程重复两次,取出离心后EP管去除上清,每管保留100μL处理后的细胞悬液。除PI单染和空白对照组,每管加5μL的FITC(绿),避光染色10分钟。每管加5μL PI(红),注意混匀,染完后1小时内测。加300μL PBS和样品于流式小管中,标记样本,测量前吹打匀。染色及数据统计:PI表示晚期凋亡,FITC染色表示早期凋亡。Q4代表早期凋亡;Q2代表晚期坏死;Q1代表损伤,一般以Q2+Q4为主。6.免疫荧光培养细胞时先每皿铺放一张细胞爬片(WBS),取培养好的神经元,4%多聚甲醛固定30分钟,并用PBS清洗10分钟叁次。3%BSA封闭液封闭30分钟,取300倍稀释的NeuN一抗稀释液(Abcam)50μL 4℃湿盒中孵育一夜。第二天PBS清洗10分钟叁次,100倍稀释FITC荧光二抗(中杉金桥)50μL敷育两小时。PBS清洗10分钟叁次后,DAPI原液染核10分钟,再次重复清洗步骤,取出处理好的细胞爬片,用甘油封片,荧光显微镜拍摄NeuN与细胞核表达情况。7.统计分析根据Western Blot免疫印迹实验分别将其PVDF膜成像灰度值转换成标准化比值。使用GraphPad 7.0软件绘制对照组,KN93加药组,KN93与TTX共同加药组和KN93与p-JNK共同加药组。免疫荧光通过Image J进行统计计算。使用SPSS软件评估数据的显着性差异,统计方法主要为学生氏t检验和方差分析,数据为平均值+标准误,P<0.05认为具有统计学差异,P<0.01认为具有显着性统计学差异。结果1.KN93给药后24小时对细胞生存率与形态学的影响利用CCK8实验法,应用KN93按照0、0.1、0.3、1、3、10、30、100μmol的浓度梯度给药24小时后进行浓度效应曲线测定。细胞存活率随KN93浓度升高而下降,当KN93浓度为25μmol时,细胞存活率为50%即细胞半数致死剂量并具有统计学意义(n=6)。经过KN93给药后,原代培养海马神经元中通过免疫荧光染色法发现NeuN染色的阳性细胞百分比均有下降,从细胞形态学角度证明KN93能导致细胞死亡。2.KN93给药后24小时对细胞凋亡的影响在此基础上,通过Western Blot实验法对凋亡相关的几个通路蛋白进行验证,发现Caspase-3蛋白表达增加,凋亡通路其他相关蛋白(BCL-2,Bax,Cytochrome-c)也体现出下降或升高的趋势,证明KN93给药后24小时激活凋亡通路,诱导细胞凋亡(n=6)。根据蛋白层面表达,对实验组和对照组利用流式细胞术观察细胞凋亡程度,发现25μmol KN93给药24小时后细胞达到半数凋亡(n=6)。3.KN93给药后24小时对VGSC的影响为了进一步了解24小时KN93给药诱导细胞凋亡并对神经系统的影响,我们研究其对VGSC四个亚型Na_V1.1,Na_V1.2,Na_V1.3,Na_V1.6的作用。电压型门控VGSC四个亚型KN93给药处理24小时后,我们从蛋白层面发现表达变化。与对照组相比Na _V1.1与Na_V1.2两个亚型上调,Na_V1.6亚型下调,Na _V1.3有微弱改变但不具有统计学意义。这一现象表明钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的抑制剂KN93给药后24小时改变VGSC的表达。4.p-JNK信号通路参与CaMKⅡ抑制剂KN93诱导的细胞凋亡KN93给药后24小时可作用于p-CaMKII通路,p-JNK为p-CaMKⅡ通路中的下游蛋白,我们应用CCK8实验法分别得出p-JNK抑制剂,p-JNK抑制剂与KN93在不同浓度时间条件下对细胞存活率的影响。通过免疫荧光技术在细胞形态表达层面观察p-JNK抑制剂对细胞凋亡的影响。利用Western Blot实验法发现凋亡代表性蛋白Caspase-3表达下降其他与凋亡通道相关的上下游抗体蛋白也均有变化,且p-JNK抑制剂(SP600125)可抑制KN93诱导的p-JNK表达增加。5.p-JNK信号通路参与CaMKⅡ抑制剂KN93诱导的VGSC表达异常我们应用免疫印迹实验研究CaMKⅡ抑制剂KN93在蛋白表达层面对VGSC四个亚型Na _V1.1、Na_V1.2、Na_V1.3和Na _V1.6的影响。与KN93给药后24小时组比较,p-JNK抑制剂可以降低Na_V1.1和Na_V1.2表达,升高Na_V1.6表达。结论与研究意义首先,我们应用CCK8测试不同给药浓度下的细胞存活率,之后应用荧光染色染色和Western Blot免疫印迹实验法分别在细胞形态层面和蛋白表达层面观察给药对细胞凋亡的影响。实验发现KN93给药后24小时可诱导细胞凋亡,而不同VGSC亚型对KN93给药后24小时呈现不同表达。为了进一步探究KN93给药后24小时作用机制,应用p-JNK抑制剂验证钙调蛋白激酶所在通路机制。数据显示,p-JNK抑制剂对KN93给药后24小时导致的细胞凋亡具有逆转作用,并对VGSC不同亚型具有不同影响,说明p-JNK可影响VGSC表达与细胞凋亡。综上所述,我们关注KN93给药后24小时对VGSC的影响与p-JNK抑制剂对其细胞凋亡的逆转和作用机制。在下一步的工作中,我们进一步研究KN93给药后24小时诱导的毒性机制。综上,本研究揭示KN93毒性作用,初步表明p-JNK通路参与毒性作用机制,进一步揭示癫痫发病机制并为寻找抗癫痫药物的新靶点提供理论依据。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-02-01）
徐梦军,高天,王鹏飞,李鸽子,康国章[10]（2019）在《钙依赖性蛋白激酶34在小麦籽粒淀粉合成的功能》一文中研究指出钙依赖性蛋白激酶在调控植物发育与物质合成中发挥重要功能。为探讨一个钙依赖性蛋白激酶-TaCPK34在小麦淀粉合成中的功能,利用大麦条纹花叶病介导的基因沉默技术(barley stripe mosaic virus-virus induced gene-silencing,BSMV-VIGS)将该基因沉默,并在田间条件下测定灌浆期间沉默植株籽粒内TaCPK34基因的表达量及成熟籽粒的淀粉性状。结果表明,在花后15 d、20 d、26 d和30 d,BSMV-VIGS-TaCPK34沉默植株中TaCPK34基因表达量受到显着抑制(63.8%～97.8%); BSMV-VIGS-TaCPK34沉默植株成熟籽粒淀粉含量、千粒重、粒长和粒宽均显着降低(降幅分别为6.0%、7.1%、4.4%和11.0%);扫描电镜观察发现BSMVVIGS-TaCPK34沉默植株成熟籽粒内淀粉粒排列疏松且数量减少。这些研究结果表明TaCPK34在小麦籽粒灌浆期间对籽粒淀粉的合成有重要影响。(本文来源于《中国农业科技导报》期刊2019年02期）
依赖性蛋白激酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的明确Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路在氨诱导星形胶质细胞水肿中的作用。方法①向体外培养星形胶质细胞中分别加入磷脂酶(PLC)抑制剂U73122(1μmol/L),Ca~(2+)螯合剂BAPTA(25μmol/L)或PKC抑制剂GF109203X(3μmol/L),再以氯化铵刺激细胞12 h,以Calcein作为荧光探针检测细胞水肿情况;②向细胞中分别加入PLC抑制剂U73122或表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478(1μmol/L),再加入氯化铵,以Fura-2作为荧光探针,检测细胞内Ca~(2+)瞬时变化;③氯化铵刺激细胞20 min,免疫共沉淀法检测PLC/EGFR相互结合情况;④向细胞中加入PKC抑制剂GF109203X,再以氯化铵刺激星形胶质细胞2 h检测ERK磷酸化情况。结果①U73122、BAPTA及GF109203X预处理均可显着抑制氨诱导的星形胶质细胞水肿(均P<0.05);②U73122及AG1478显着抑制氨诱导的细胞内Ca~(2+)瞬时升高(均P<0.05);③20 min氨刺激可增加PLC与EGFR间的相互结合(P<0.05);④GF109203X显着抑制氨诱导的ERK磷酸化(P<0.05)。结论 Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路介导了氨诱导星形胶质细胞水肿的过程。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
依赖性蛋白激酶论文参考文献
[1].梁威,杨铁柱,沈和定,许国绿,顾冰宁.瘤背石磺钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因的克隆及组织表达[J].水产学报.2019
[2].贾桂枝,王蕊,岳怡,戴红良.Ca~(2+)-磷脂依赖性蛋白激酶通路参与氨致星形胶质细胞水肿[J].中国老年学杂志.2019
[3].郑帅,刘燕,朴春梅,刘婷婷,王吉静.巨噬细胞特异性敲除一磷酸腺苷激活依赖性蛋白激酶基因的小鼠模型构建[J].心肺血管病杂志.2019
[4].雷蕾,王璐,姚丽娜,郝心愿,曾建明.茶树钙依赖性蛋白激酶基因CsCDPK17的鉴定及表达分析[J].茶叶科学.2019
[5].盛晴宇,张泽茹,罗放.钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα对阿片诱导痛觉过敏大鼠中央杏仁核抑制性突触后电流的影响[J].临床麻醉学杂志.2019
[6].刘淼,范平生,张腾跃,黄金,樊高飞.钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在维拉帕米逆转肺腺癌顺铂化疗耐药中的作用[J].实用临床医药杂志.2019
[7].席凯文,耿鑫,余化霖,边慧.钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在慢性疼痛中作用的研究进展[J].山东医药.2019
[8].刘华梅,李宗恒,刘俊才.外阴上皮内非瘤样病变女性患者细胞周期蛋白D1、周期素依赖性蛋白激酶4和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27的表达及意义[J].中国妇幼保健.2019
[9].赵东仪.钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的抑制剂KN93对大鼠海马培养神经元与PC12细胞的毒性作用与机制[D].中国医科大学.2019
[10].徐梦军,高天,王鹏飞,李鸽子,康国章.钙依赖性蛋白激酶34在小麦籽粒淀粉合成的功能[J].中国农业科技导报.2019