阿司匹林对大鼠皮质神经元缺氧缺糖再灌注损伤保护作用的研究

论文摘要

背景:缺血性脑血管疾病是危害人类健康的主要疾病之一,具有发病率高、致残率高和病死率高的特点,严重影响着人类的健康和生命,长期以来一直是医学界关注的热点问题,因此,对其发病机制的研究以及如何进行防治、进行研究具有重要的医学意义和社会价值。20世纪90年代以来,t-PA溶栓治疗获得了很大进展,但由于溶栓治疗时间窗的限制以及出血等严重并发症,其应用具有很大的局限性。目前,溶栓治疗等血流重建或增加缺血区的血流供应的治疗手段已很成功,但脑缺血再灌注后带来的损伤使治疗不能达到预期的结果。现代医学研究认为脑缺血再灌注损伤是大多数缺血性脑血管疾病的主要病理生理过程,其发生机制涉及到自由基、兴奋性氨基酸、钙超载、能量耗竭等多个问题。因而缺血后再灌注损伤的理论基础和如何防治是目前国内外亟待解决的问题之一。阿司匹林（Aspirin, ASA）是经典的非甾体抗炎药物,其解热、镇痛、抗炎、抗风湿和抗血栓形成的作用熟为人知,并广泛应用于临床。近年来的研究证实,ASA具有直接的神经保护作用,其作用机制是多方面,这些结果已经引起了越来越多的关注。目的:大量实验研究已表明阿司匹林具有直接的神经保护作用,能够显著减少缺血再灌注大鼠的脑梗死面积,减少脑内炎症细胞、粘附分子等作用。但以往实验多采用在体急性缺血损伤模型来观察细胞形态改变和研究损伤机制,本研究通过采用大鼠皮质神经细胞原代离体培养,排除活体状态下内分泌、循环、体液等多种因素的影响,研究阿司匹林是否对脑内单个神经细胞有直接保护作用及其发挥作用的可能机制。选用大鼠的皮质神经细胞为研究对象,建立原代培养大鼠皮质神经细胞的缺氧缺糖再灌注损伤模型,观察缺氧缺糖再灌注损伤对大鼠皮质神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响;并使用不同浓度阿司匹林进行药物干预,观察阿司匹林对抗缺氧缺糖再灌注损伤后引发的大鼠皮质神经细胞损伤的作用,并与缺氧缺糖再灌注损伤组相比较,探讨阿司匹林作为药物对抗神经元缺血性损伤的可行性,从而揭示阿司匹林的神经保护作用、作用机制及有效剂量,为临床治疗用药提供理论基础和实验依据。方法:1.选取24h内新生Wistar大鼠,雌雄不限,75%乙醇浸泡消毒后,剥离头皮及颅骨,取出完整脑组织,钝性分离大脑皮层,原代培养大鼠皮质神经细胞。2.取体外培养7天的Wistar大鼠皮质神经细胞经鉴定后,随机分为3大组:①正常对照组（control）;②缺氧缺糖再灌注模型组;③缺氧缺糖加不同浓度阿司匹林组。3.每组神经细胞都在倒置相差显微镜下动态观察其形态学变化,神经细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出率和MTT还原剂检测神经细胞活性;Calcein染色法检测神经细胞存活状态;流式细胞术检测神经细胞线粒体膜电位（MMP）和双染法（Annexin V-FITC及PI）检测不同组别神经细胞的凋亡情况。结果:1.新生大鼠皮质神经细胞离体培养7天后,神经细胞清晰可见,细胞贴壁良好,胞体增大,多数呈锥体状或多极形,胞体有明显的折光性,立体感强,细胞膜边界光滑、清楚,神经突起相互联络成网。用NSE免疫组织化学染色作分类计数,神经细胞约占90%95%。2.缺氧缺糖再灌注损伤后,OGD/R模型组的神经细胞线粒体活性和线粒体膜电位水平较对照组显著降低,细胞LDH漏出率和细胞凋亡及坏死百分率均较对照组显著升高。阿司匹林组神经细胞线粒体活性和线粒体膜电位水平均较OGD/R模型组显著升高,细胞LDH漏出率和细胞凋亡及坏死百分率较OGD/R模型组显著降低,上述几项指标结果表明阿司匹林能显著提高神经细胞线粒体活性和膜电位水平,降低细胞凋亡及坏死的百分率,其作用随剂量增加而作用增加。结论:所有指标显示高中低三个浓度阿司匹林均有直接的神经保护作用,尤其是高浓度阿司匹林,可能是通过抑制缺氧缺糖再灌注损伤所致的神经细胞线粒体活性和线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生,进而发挥对神经细胞的保护作用。

论文目录

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• 英文摘要
• 缩略词表
• 正文
• 前言
• 实验材料与试剂
• 实验方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
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• 参考文献
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