利用大鼠肝再生模型对细胞G0、G1期差异蛋白质组学谱的初步研究

论文摘要

G0/G1转换的研究日益受到关注,但对其机制还知之甚少。我们选用大鼠2/3肝切除模型获得G0期和G1期的同步化细胞,从蛋白质水平上检测G0和 G1期细胞的差异,探讨肝再生早期G0/G1转换的机理。 提取G0期细胞（假手术6小时后的肝细胞）和G1期细胞（2/3肝切除后6小时剩余肝组织的细胞）的总蛋白和核组分蛋白,用pH3-10线性梯度双向凝胶电泳分离,通过Melanie软件分析,共检测到了55个差异蛋白点,其中37个在肝细胞G1期表达上调,18个表达下调。通过MALDI-QTOF-MS 和 MS/MS鉴定出了43个蛋白,我们对这些蛋白在肝再生及G0/G1转换中的作用进行了探讨。 对双向电泳无法检测到的小分子量的蛋白,我们采用了SELDI芯片技术,用H4、IMAC3、IMAC40、SAX和WCX芯片分析了G0和G1期细胞的总蛋白,并用SAX和WCX芯片分析了核组分和线粒体组分的蛋白,共检测到101个差异蛋白峰,其中64个在肝细胞G1期表达上调,37个表达下调。根据SELDI提供的差异蛋白峰的分子量,大致等电点,磷酸化修饰等信息,在数据库中检索到46个蛋白,为后续的进一步鉴定提供了参考。另外,我们还尝试了消化后分析的方法,结合SELDI和质谱技术,作为双向电泳的验证和补充。目前用这种方法检测并鉴定出了7种差异蛋白,其中5种蛋白通过双向电泳也检测到,另外2个差异蛋白是双向未能检测到的。

论文目录

• 文献综述
• 1 G0/G1期转化研究背景
• 2 大鼠2/3肝切除模型与G0/G1转换
• 3 蛋白质组学
• 3.1 蛋白质组学（proteomics）简介
• 3.2 差异蛋白质组学主要技术
• 3.2.1 双向凝胶电泳
• 3.2.2 质谱
• 3.2.3 SELDI 蛋白芯片
• 前 言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 总结
• 参考文献