对聚伞花素抗炎作用的研究

论文摘要

败血症对人类健康危害极大，同时给畜牧业造成巨大的经济损失。其致病因素多种多样，主要由细菌感染引起。脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）为革兰氏阴性菌细胞壁的重要成分之一，也是引起败血症的主要原因之一。LPS能刺激单核/巨噬细胞对多种炎症因子的过度表达，包括促炎因子（TNF-α、IL-1、IL-6）和抗炎因子（IL-10），这些细胞因子相互作用扩大炎症反应，导致炎症反应失控。参与炎症反应的下游细胞转导通路主要有两条，即MAPKs通路和NF-κB通路。NF-κB是核转录因子，在静息细胞中与IκB形成复合体，以无活性形式存在于胞浆中；当细胞受细胞外信号刺激后，IκB激酶复合体（IκB kinase, IKK）活化将IκB磷酸化，使NF-κB暴露核定位位点，游离的NF-κB迅速移位到细胞核，诱导相关基因转录。MAPKs主要有3个亚族：ERK、JNK、P38，其活化过程是借助上游激酶的磷酸化作用；MAPKs主要参与细胞增殖、分化、转化及凋亡等细胞生物学反应，而且与细胞因子的产生和分泌关系密切。败血症引起患者和动物的死亡率很高，但是能够有效降低其致死率的药物却很少，针对某一炎症介质而研制的抗体或其它制剂并不能有效控制败血症的发生、改善患者和动物的生存率。近年来人们致力于以炎症信号通路上的某一环节作为靶点从而控制败血症的研究，取得了一定进展。抗生素在预防和治疗败血症及其它感染性疾病中作出了突出贡献，但是随着抗生素的普遍应用和不规范使用，加速了细菌耐药性的出现，迫使人们将焦点移向资源丰富的中草药。本文试验通过药物筛选，发现对聚伞花素、厚朴酚具有抗炎潜力，但由于厚朴酚已有一些抗炎相关报道，而且在较低剂量下有细胞毒性，所以选择牛至中的主要活性成分对聚伞花素作为研究对象。对聚伞花素的抗微生物活性已经得到证实，但是其抗炎活性鲜有报道。本实验旨在从体外和体内两个层面研究中药单体对聚伞花素抗炎作用及其作用机制，评价其对败血症实验动物模型的保护作用。在预实验中，采用MTT法评价对聚伞花素对RAW264.7细胞系的细胞毒性，结果显示对聚伞花素在0-428.64μg/mL范围内没有明显的细胞毒性。为了研究对聚伞花素对炎症过程中细胞因子（TNF-α、IL-1β、 IL-6和IL-10）分泌的调节作用，我们建立了体内和体外病理模型，用LPS刺激RAW264.7细胞系和C57BL/6小鼠，同时通过半定量RT-PCR法检测了该单体对细胞因子基因表达的影响。实验结果显示，对聚伞花素对LPS引起的RAW264.7细胞及C57BL/6小鼠的TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌均有一定程度的抑制作用，下调其基因表达，并呈现一定剂量依赖关系，高剂量作用显著；对聚伞花素在体内实验中，对IL-10的表达也有一定的促进作用。在进一步研究中，用Westernblot法研究对聚伞花素对MAPKs（ERK、JNK、P38）和IκB通路的阻断作用，发现对聚伞花素可显著降低ERK、JNK、P38和IκB通路的活化。基于以上研究，我们通过建立小鼠败血症模型评价对聚伞花素对LPS诱导的小鼠败血症模型的保护作用，结果显示对聚伞花素可显著提高小鼠的存活率。由此可以推测，在一定剂量范围内对聚伞花素具有潜在抗炎活性，其机制可能与阻断MAPKs和NF-κB通路有关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩写表
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 对聚伞花素的研究进展
• 1 牛至概述
• 2 对聚伞花素的理化性质及合成
• 3 对聚伞花素的药理活性
• 第二章 败血症的研究进展
• 1 败血症概述
• 2 败血症的免疫学研究
• 3 败血症对机体机能的影响
• 4 败血症的分子机制
• 5 败血症的治疗
• 第二篇 实验部分
• 第一章 对聚伞花素体外抗炎作用及机制的研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 第二章 对聚伞花素对败血症小鼠的保护作用
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 小结
• 结论
• 参考文献
• 导师简介
• 作者简介
• 致谢