导读:本文包含了甲醇营养型酵母论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:甲醇,甲烷,单细胞蛋白,甲基营养型酵母
甲醇营养型酵母论文文献综述
缑仲轩,叶立生,朱芮,王露璇,陆华建[1]（2018）在《一株嗜甲醇的甲基营养型酵母的筛选与鉴定》一文中研究指出从东经119°2′16″、北纬33°32′47″的湖泊岸边土壤中筛选到一株理想的甲基营养型酵母。该菌呈长圆形,直径3μm,长可以达到5μm,经18SrDNA分析鉴定其为赭色掷孢酵母(Sporobolomyces carnicolor);该菌除可利用甲烷外,亦可利用甲醇、乙醇、葡萄糖、甘油、淀粉等,甲醇是其最佳碳源,最佳浓度为2.0%;采用甲醇-甲烷两段法培养,该菌的OD600值可达到2.1。(本文来源于《化学与生物工程》期刊2018年12期）
高敏杰,史仲平[2]（2013）在《甲醇营养型重组毕赤酵母高效表达外源蛋白过程的控制与优化(英文)》一文中研究指出The methylotrophic yeast Pichia pastoris is a highly successful system for production of a variety of heterologous proteins due to its unique features/abilities for effective protein expression, and tremendous efforts have been made to increase heterologous protein productivity by P. pastoris in recent years. When new engineered yeast strains are constructed and are ready to use for industrial protein production, process control and optimization techniques should be applied to improve the fermentation performance in the following aspects: (1) increase recombinant cell concentrations in fermentor to high density during growth phase; (2) effectively induce heterologous proteins by enhancing/stabilizing titers or concentrations of the proteins during induction phase; (3) decrease operation costs by relieving the working loads of heat-exchange and oxygen supply. This article reviews and discusses the key and commonly used techniques in heterologous protein production by P. pastoris, with the focus on optimizations of fermentation media and basic operation conditions, development of optimal glycerol feeding strategies for achieving high density cultivation of P. pastoris and effective heterologous protein induction methods by regulating specific growth rate, methanol concentration, temperatures, mixture ratio of multi-carbon substrates, etc. Metabolic analysis for recombinant protein production by P. pastoris is also introduced to interpret the mechanism of sub-optimal heterologous protein production and to explore further optimal expression methods.(本文来源于《Chinese Journal of Chemical Engineering》期刊2013年02期）
张瓅文[3]（2010）在《中华蜜蜂AccMRJP1在大肠杆菌及甲醇毕赤酵母中的表达及营养功能的研究》一文中研究指出蜂王浆(royal jelly)是哺育工蜂头部王浆腺的分泌物,是1-3龄工蜂幼虫及蜂王的终生食料,有着众多的营养保健和生理活性功能。蜂王浆的神奇功效与它所具有的活性成分密不可分。蜂王浆化学成分极为复杂,其中蛋白质是主要营养成分,含量约占王浆干物质的50%,分为可溶性及不可溶性两大类,可溶性蛋白占王浆总蛋白的82—90%,被称为主要王浆蛋白MRJPs(majorroyal jelly proteins)。其中MRJP1是MRJPs含量最丰富,也是目前研究最多的蛋白。它是一个56KD-57KD的糖蛋白,占MRJPs的48%,被认为是与王浆酸同样重要的王浆质量指标和功效成分,有着重要研究价值。本研究首先根据中华蜜蜂(A.cerana cerana)MRJP1(下称AccMRJP1)序列,从已完成表达序列标签(Expressed Sequence Tags,EST)测序的蜂脑cDNA文库选出3个AccMRJP1克隆,通过PCR检测和测序筛选获得一个cDNA全长为1302bp、可编码433个氨基酸残基的AccMRJP1开放阅读框架(Open Reading Frame,ORF),该氨基酸序列与已报道的AccMRJP1编码序列(GenBank登录号:AY279539)的同源性为99.8%。其次,将AccMRJP1基因克隆到原核和真核表达载体并实现了其在大肠杆菌及甲醇毕赤酵母中的表达。将该AccMRJP1基因克隆到表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21(Escherichiacoli BL21)中进行融合表达。SDS-PAGE电泳分析显示一条分子量大小约76 kDa,占细胞总蛋白的17.7%特异性条带;以GST多抗为一抗作Western blot分析,检测到AccMRJP1与GST的融合表达蛋白印迹,并通过亲和柱分离获得了纯化的表达产物,证明AccMRJP1基因在大肠杆菌中已表达成功。构建了AccMRJP1/pPIC 9K真核表达载体,电转化到甲醇毕赤酵母菌GS115(Pichia pastoris GS115)中进行表达。SDS-PAGE电泳分析表明,表达的产物在58 KDa处出现特异性条带,分别以His单抗和AccMRJP1多抗为一抗作Western blot检测,检测到表达蛋白印迹,说明AccMRJP1基因在酵母菌中也已表达成功。此外,还利用AccMRJP1原核表达表达产物作抗原免疫家兔,获得兔抗AccMRJP1的多克隆抗体,效价高达1.6×10~4,为MRJPs家族其他成员及其基因产物的检测提供了一个有效手段。最后,用硫酸铵沉淀法分离了AccMRJP1表达产物,对昆虫细胞Tn-5B1-4生长影响进行了研究。实验表明,AccMRJP1具有一定的营养功能,可以促进细胞的生长,有可能代替牛血清在细胞培养中发挥作用。本实验成功构建了AccMRJP1原核及真核表达载体,制备了AccMRJP1多克隆抗体,为发酵法规模性生产AccMRJP1、重组蛋白活性的研究及MRJPs家族成员及其基因产物的检测奠定了基础,纯化的AccMRJP1产物可促进细胞生长,有可能代替牛血清在细胞培养中发挥作用,具有重要的研究价值和应用前景。(本文来源于《浙江大学》期刊2010-01-01）
杨杰,饶贤才,侯瑞,胡晓梅,陈志瑾[4]（2009）在《金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达》一文中研究指出目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,构建其真核表达质粒,为嵌合基因的高效、分泌型表达奠定基础。方法在序列结构分析的基础上,设计引物从MRSA菌株中扩增其耐药性相关转糖基酶(TGase)和转肽酶(TPase)活性片段,进一步用酶切连接等分子生物学操作构建TG-TPase嵌合基因,亚克隆至酵母表达质粒pPIC9K中,转化DH5α大肠埃希菌。经酶切、PCR和核苷酸测序鉴定正确的重组质粒用SalⅠ线性化,整合入甲醇营养型毕赤酵母GS115中,在DNA和基因转录水平鉴定出阳性重组酵母。结果采用PCR从MRSA基因组中扩增得到了873bp的TGase片段和1044bp的TPase片段。以酶切连接构建的TG-TPase嵌合基因经酶切、PCR鉴定,能获得约1900bp的融合片段,与预期结果相符,测序表明序列和阅读框均正确。线性化的重组质粒转化GS115后,得到5个高拷贝阳性转化子,经诱导表达和PCR鉴定,这些转化子能转录出目的基因的mRNA。结论成功构建了含TG-TPase嵌合基因的重组毕赤酵母工程菌,为进一步高效制备嵌合蛋白、进而利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选创造前提。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2009年02期）
何仰东,姜曼,倪兵,吴玉章[5]（2005）在《SARS-CoV S1蛋白在甲醇营养型酵母中表达及鉴定》一文中研究指出目的获得保持生物学活性、易于纯化、高产量的严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute resp iratorysyndrom coronavirus,SARS-CoV)S1蛋白,以便进一步研究S1蛋白及其抗体的功能。方法将SARS-CoV S1基因重组入酵母表达载体pMETαA,经过酶切和测序鉴定后,通过电穿孔法将重组质粒S1-pMETαA转化入宿主酵母菌株PMAD11,使其在甲醇的诱导下表达目的蛋白。最后用覆盖分析法对重组转化子初步分析,SDS-PAGE和W esntern b lotting法鉴定目的蛋白的表达和特异性。结果酶切鉴定和测序结果证实了S1基因成功地克隆到pMETαA载体中;覆盖分析、SDS-PAGE和免疫印迹法证实S1基因得到正确的表达。结论利用酵母表达系统,成功地克隆和表达了SARS-CoV S1蛋白,为进一步纯化该蛋白和研究其功能奠定了基础。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2005年18期）
魏虹,王金富,邓磊[6]（2005）在《甲醇营养型酵母表达系统及其应用进展》一文中研究指出甲醇酵母表达系统是一种广泛使用的真核表达系统 ,它具有表达量高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等优点。本文综述了甲醇酵母表达系统的特点、提高重组蛋白表达量的方法及近年来甲醇酵母表达系统在病原微生物及抗体工程中的一些研究应用状况(本文来源于《石河子大学学报(自然科学版)》期刊2005年01期）
佟玉品[7]（2002）在《外源基因在甲醇营养型酵母中的表达及优化表达策略》一文中研究指出甲醇营养型酵母作为第二代酵母近年来在基因工程产品制备过程中得以广泛应用 ,目前已成为独具特色的外源基因表达系统。外源基因在表达过程中受多种因素影响。本文就外源基因在甲醇营养型酵母中的表达、影响因素及优化外源蛋白表达方案等问题作一综合介绍(本文来源于《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》期刊2002年03期）
邓兵兵,方宏清,薛冲,赵洪亮,刘志敏[8]（2001）在《甲醇营养型酵母高密度培养过程中甲醇和乙醇的GC快速检测》一文中研究指出采用气相色谱法 (GC)快速检测甲醇营养型酵母发酵液中的甲醇、乙醇含量 ,具有样品处理简便 ,测定时间较短 ,结果重现性好的特点。在 1～ 10mg/mL范围内具有很好的线性关系。在毕赤酵母高密度高表达发酵过程中应用此法对甲醇和乙醇进行实时监控 ,细胞终密度超过 30 0g/L(干重 )。本方法为甲醇营养型酵母工程菌的发酵中试工艺研究提供了重要的发酵生化参数。(本文来源于《工业微生物》期刊2001年02期）
李旌军,黄秉仁[9]（1999）在《人胰岛素样生长因子Ⅱ在甲醇营养型酵母P.pastoris中的表达、分泌和性质研究》一文中研究指出为获得ＩＧＦ－Ⅱ的高效表达，构建了其多拷贝、分泌型表达载体：含有５个串联的ＩＧＦ－Ⅱ表达单元；由受甲醇诱导的醇氧化酶启动子控制表达；利用啤酒酵母α因子的前导肽引导分泌．线形化表达载体转化Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ蛋白酶缺陷型菌株后，筛选到有ＩＧＦ－Ⅱ表达和分泌的阳性转化子；进一步优化表达、培养条件后，ＩＧＦ－Ⅱ在高密度发酵上清中的产量可达６０ ｍ ｇ／Ｌ．对Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ产生的ｒｈＩＧＦ－Ⅱ的性质分析表明，其具有正确的分子量，Ｎ 端和较好的生物活性．(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊1999年06期）
范乔,刘宏迪[10]（1999）在《甲醇营养型酵母表达外源蛋白的特点及策略》一文中研究指出酵母作为一类外源基因的表达系统具有很多优点。它们属于单细胞生物，因而保留了细菌易于操作和生长快速的特点；另一方面，酵母具真核生物的亚细胞结构，故具有糖基化，脂肪酸化，蛋白质磷酸化等翻译后修饰功能。大部分重组蛋白的表达都是以酿酒酵母（Xic’，bar．oo(本文来源于《微生物学通报》期刊1999年04期）
甲醇营养型酵母论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
The methylotrophic yeast Pichia pastoris is a highly successful system for production of a variety of heterologous proteins due to its unique features/abilities for effective protein expression, and tremendous efforts have been made to increase heterologous protein productivity by P. pastoris in recent years. When new engineered yeast strains are constructed and are ready to use for industrial protein production, process control and optimization techniques should be applied to improve the fermentation performance in the following aspects: (1) increase recombinant cell concentrations in fermentor to high density during growth phase; (2) effectively induce heterologous proteins by enhancing/stabilizing titers or concentrations of the proteins during induction phase; (3) decrease operation costs by relieving the working loads of heat-exchange and oxygen supply. This article reviews and discusses the key and commonly used techniques in heterologous protein production by P. pastoris, with the focus on optimizations of fermentation media and basic operation conditions, development of optimal glycerol feeding strategies for achieving high density cultivation of P. pastoris and effective heterologous protein induction methods by regulating specific growth rate, methanol concentration, temperatures, mixture ratio of multi-carbon substrates, etc. Metabolic analysis for recombinant protein production by P. pastoris is also introduced to interpret the mechanism of sub-optimal heterologous protein production and to explore further optimal expression methods.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
甲醇营养型酵母论文参考文献
[1].缑仲轩,叶立生,朱芮,王露璇,陆华建.一株嗜甲醇的甲基营养型酵母的筛选与鉴定[J].化学与生物工程.2018
[2].高敏杰,史仲平.甲醇营养型重组毕赤酵母高效表达外源蛋白过程的控制与优化(英文)[J].ChineseJournalofChemicalEngineering.2013
[3].张瓅文.中华蜜蜂AccMRJP1在大肠杆菌及甲醇毕赤酵母中的表达及营养功能的研究[D].浙江大学.2010
[4].杨杰,饶贤才,侯瑞,胡晓梅,陈志瑾.金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达[J].免疫学杂志.2009
[5].何仰东,姜曼,倪兵,吴玉章.SARS-CoVS1蛋白在甲醇营养型酵母中表达及鉴定[J].第叁军医大学学报.2005
[6].魏虹,王金富,邓磊.甲醇营养型酵母表达系统及其应用进展[J].石河子大学学报(自然科学版).2005
[7].佟玉品.外源基因在甲醇营养型酵母中的表达及优化表达策略[J].国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册.2002
[8].邓兵兵,方宏清,薛冲,赵洪亮,刘志敏.甲醇营养型酵母高密度培养过程中甲醇和乙醇的GC快速检测[J].工业微生物.2001
[9].李旌军,黄秉仁.人胰岛素样生长因子Ⅱ在甲醇营养型酵母P.pastoris中的表达、分泌和性质研究[J].中国生物化学与分子生物学报.1999
[10].范乔,刘宏迪.甲醇营养型酵母表达外源蛋白的特点及策略[J].微生物学通报.1999