Exosome用于抗HBV免疫治疗的实验研究

论文摘要

目的初步探索Exosome体外抗HBV特异性免疫活性。方法以细胞因子GM-CSF、IL-4及TNF-α培养健康人PBMC来源的DCs,通过流式细胞仪分析细胞表型判断所收获的DCs成熟度;采用多步骤离心法分离纯化DCs培养上清中的Exosome,western blotting分析蛋白性质;以HBcAg刺激DCs,MTS法检测收获的HBcAg特异性DEXs刺激PBMC增殖的能力、ELISPOT法检测HBcAg特异性DEXs刺激的PBMC产IFN-γ的能力。结果成熟DC表面HLA-DR、CD80/CD86及CD83分子的表达水平明显高于未成熟DC者（分别为45.3±8.3% vs 16.5±6.8%、90.2±6.5% / 92.38±13.6% vs 6.3±4.5%/49.8±9.2%、83.53±10.8% vs 4.3±2.8%,P<0.05）;成熟DCs分泌的Exosome表达HLA-DR、CD86分子也强于未成熟DCs分泌者;淋巴细胞增殖实验结果显示HBcAg特异性DEXs体外刺激PBMC增殖能力强于未成熟者（吸光度0.904±0.003 vs 0.545±0.010,P<0.001）,但不如HBcAg特异性mDCs（0.904±0.003 vs 1.034±0.004,P<0.05）;HBcAg特异性DEXs刺激的PBMC产IFN-γ能力强于未成熟者（斑点数32±13 vs 14±2,P<0.05）,但也不如HBcAg特异性mDCs（32±13 vs 98±17,P≤0.01 ）。结论HBcAg特异性mDEXs可有效激活自体PBMC增殖及分泌IFN-γ,其体外抗HBV特异性免疫活性强于未成熟者。

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• 结论
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