论文摘要
目的：建立检测泡球蚴感染小鼠肝脏IL-17的实时荧光定量RT-PCR方法,并用于泡球蚴病小鼠IL-17基因检测。观察泡球蚴（Em）感染Balb/c小鼠肝脏中IL-17的表达,探讨其在泡型包虫感染免疫发生中的作用与机制。方法：通过腹腔注射100μ1泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型,感染4wk后处死,提取肝脏总RNA,反转录得到cDNA;登陆GenBank,得到IL-17基因（U43088.1）全序列,选取保守序列,应用primer 5设计引物,β-actin作为内参,以10倍梯度稀释IL-17 PCR产物为标准品,进行实时荧光定量RT-PCR以确定方法的特异性和灵敏度；绘制标准曲线,确定IL-17基因检测的最佳条件。HE和Masson染色观察肝组织病理改变和纤维化程度；免疫组织化学技术检测IL-17在肝内的表达及定位。结果：1)用建立的实时定量RT-PCR检测IL-17基因无非特异性扩增,各样品熔解温度均在81.0℃,熔解峰单一；mRNA检出限为1×102pg,106～102pg总RNA均有扩增；泡球蚴感染4周后,IL-17基因表达显著增加,感染组和对照组分别为（0.008728±0.000984）和（0.003823±0.00082）,差异有统计学意义（t=-3.598,P<0.05）2)病理学观察感染时肝汇管周围有炎细胞浸润和肝纤维化加重。3)免疫组织化学显示IL-17主要表达部位是肝窦区、胞浆、胞膜及病灶处的生发层周围。感染组和对照组分别为（2.64±0.66）和（1.45±0.57）差异有统计学意义（t=＝-2.845,P<0.05）。结论：成功建立了小鼠源IL-17基因实时定量RT-PCR检测体系。经检测,小鼠感染泡球蚴4wk后IL-17基因和蛋白表达增加,表明IL-17在泡球蚴感染免疫调节中可能起重要作用。
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标签：泡球蚴论文; 肝脏论文; 实时荧光定量论文; 免疫组织化学技术论文;