论文摘要
目的探讨高糖对人视网膜色素上皮（ hRPE）细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）及色素上皮源性生长因子（PEDF）的干预作用以及p42/p44丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases MAPK）信号转导通路特异性抑制剂PD98059在高糖诱导的hRPE细胞VEGF表达中的作用。方法采用hRPE细胞株,第一部分:分为1.正常糖浓度组（NG,5.6mmol/L葡萄糖）,2.高糖组（HG1:15.0mmol/L葡萄糖;HG2:20.0mmol/L葡萄糖;HG3:30.0mmol/L葡萄糖）,3.高渗组（HM,24.4mmol/L甘露醇+5.6mmol/L葡萄糖）;第二部分,在各糖浓度组基础上应用p42/44MAPK特异性抑制剂PD98059处理细胞。分组如下1.PD98059组: 20.0umol/L PD98059+HG1（HG1+P）、HG2（HG2+P）、HG3（HG3+P）,2.另设一组溶剂对照组（DMSO组）,以排除DMSO的影响,DMSO组:0umol/L PD98059+HG1（HG1+D）,应用逆转录PCR（RT-PCR）检测各组hRPE细胞VEGF及PEDFmRNA的表达。应用ELISA检测各组hRPE细胞上清液中VEGF蛋白的表达。结果（1）应用RT-PCR方法检测24小时HG1、HG2、HG3、HM组细胞VEGF/β-actin吸光度比值分别为0.77±0.0208,0.84±0.0153, 1.06±0.0902, 0.80±0.0351 ,各高糖组和甘露醇高渗组与NG组0.69±0.0351相比,P<0.05。应用ELISA方法检测48小时各组细胞VEGF表达量（ng/L）,其结果与mRNA一致。（2）应用RT-PCR检测HG1、HG2、HG3各组细胞上清中PEDF/β-actin吸光度比值分别为1.96±0.1050, 1.63±0.1253, 1.11±0.0902,各实验组与NG组2.77±0.1159相比,P<0.05。（3）15.0mmol/L高糖培养人RPE细胞,应用RT-PCR方法检测0、12、24、36、48和60h培养的人RPE细胞VEGFmRNA含量（AVEGF/A?-actine ）分别为:0.33±0.0764、0.57±0.0839、0.77±0.0208、1.91±0.0902、1.76±0.0777、1.82±0.1015,各时间点VEGF表达量与0h相比,P<0.05。应用ELISA方法检测各时间点细胞上清中VEGF蛋白含量（ng/L）,其结果与mRNA一致。（4）应用RT-PCR方法检测PD98059及DMSO处理组（NG+P、HG1+P、HG2+P、HG3+P、HG1+D）VEGFmRNA含量（AVEGF/A?-actine ）分别为:0.50±0.0451、0.40±0.0433、0.67±0.0458、0.71±0.0503、0.73±0.1060,PD98059处理组和对照组相比P<0.05。应用ELISA方法检测PD98059及DMSO处理组上清中VEGF蛋白含量（ng/L）,其结果与mRNA一致。（5）NG、HG1+P组VEGFmRNA/PEDFmRNA比值与HG1组相比,均P<0.05。结论高糖可从转录及蛋白水平诱导hRPE细胞VEGF的表达,并抑制PEDF的表达。P42/44MAPK信号转导通路可能参与了高糖诱导的hRPE细胞VEGF的表达。
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