论文摘要
苦参碱是中药苦参的主要成分之一,我们前期研究发现苦参碱诱导了人白血病K562细胞分化和凋亡,但是分子机制尚不清楚。DNA甲基化是表观遗传学的重要机制之一,在肿瘤的基因异常表达起着重要作用。文献报道RIZ1基因是一种抑癌基因,在K562细胞中由于RIZ1基因启动子高甲基化导致其表达低下。在本论文中我们分别采用RT-PCR和甲基化特异性PCR（MSP）技术研究了苦参碱作用K562细胞后,其RIZ1基因mRNA表达水平和RIZ1基因启动子甲基化情况。同时我们还运用毛细管电泳（HPCE）、高效液相（HPLC）和甲基化敏感性限制性内切酶（MS-RE）技术检测了苦参碱对K562细胞基因组整体甲基化的影响。此外,利用RT-PCR技术还测定了RIZ1下游基因IGF-1 mRNA水平的表达情况。方法:1.以5-Aza CdR为去甲基化对照药物,分别用苦参碱、苦参提取液处理常规培养的白血病细胞K562株。根据实验观察的需要设置不同时间处理组。2.利用半定量RT-PCR方法检测了苦参碱作用K562细胞不同时间后RIZ1基因mRNA水平表达的变化,并同苦参提取液与DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza CdR分别诱导的RIZ1基因表达变化进行了比较。还利用RT-PCR检测K562细胞在苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理前后DNMT1 mRNA、DNMT3A mRNA、DNMT3B mRNA及IGF-1 mRNA表达的变化。3.运用MSP检测K562细胞在苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理前后RIZ1启动子甲基化状态。4.利用HPCE、HPLC、甲基化敏感性限制性内切酶法检测K562细胞在苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理K562细胞前后对基因组整体甲基化水平的影响。结果:1.通过实验发现RIZ1基因的mRNA在对照组K562细胞低表达,经苦参碱和苦参提取液作用K562细胞后,RIZ1mRNA水平表达明显升高,并呈时间依赖性;同样,5-Aza CdR作用K562细胞后,RIZ1mRNA水平表达也明显增高。2.苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理K562细胞后,RIZ1基因启动子发生去甲基化。3.苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理K562细胞前后DNMT1 mRNA、DNMT3BmRNA表达无明显变化。4.HPCE、HPLC法检测K562细胞在苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理K562细胞后基因组整体甲基化水平较处理前稍降低,但无统计学意义。5.用酶切法检测K562细胞在苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理K562细胞前后对基因组整体甲基化水平无明显影响。6.苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理K562细胞前后IGF-1 mRNA表达无明显变化。结论:1.K562细胞抑癌基因RIZ1启动子是处于高甲基化状态,导致该基因低表达。苦参碱和苦参提取液作用K562细胞后,RIZ1mRNA水平表达明显升高,说明苦参碱抗白血病作用与诱导抑癌基因RIZ1表达有关。2.苦参碱诱导K562细胞抑癌基因RIZ1上调与中药苦参提取液作用一致,提示苦参碱是苦参抗肿瘤作用的主要活性成分。3.实验结果显示苦参碱、苦参提取液和5-Aza CdR处理K562细胞后RIZ1启动子发生去甲基化,提示RIZ1基因被诱导表达上调是RIZ1基因启动子去甲基化作用所致。4.苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理K562细胞前后DNMT1 mRNA、DNMT3BmRNA表达无明显变化,说明苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR未通过调控DNMTsmRNA转录水平而诱导DNA去甲基化。5.HPCE、HPLC法检测K562细胞在苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理后基因组整体甲基化水平较处理前稍降低,而用甲基化敏感性限制性内切酶法检测K562细胞在苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理前后对基因组整体甲基化水平无明显影响,综合说明苦参碱、苦参提取液对K562细胞基因组DNA整体甲基化水平无明显作用。6.苦参碱、苦参提取液、5-Aza CdR处理K562细胞后,RIZ1基因下游的IGF-1基因mRNA并没有随RIZ1表达上调而发生明显变化,其原因在本研究中尚不清楚。
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- [1].苦参碱衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究进展[J]. 大众科技 2017(03)
- [2].施用不同浓度1.8%虫菊·苦参碱对有机高粱蚜虫的防治效果[J]. 农业科技通讯 2020(04)
- [3].苦参碱农用活性及其结构修饰研究进展[J]. 江苏农业科学 2019(08)
- [4].贵州特色药材苦参人工栽培常见病虫害发生规律及防治措施[J]. 时珍国医国药 2018(09)
- [5].苦参碱多种抗癌功效研究进展[J]. 实用医学杂志 2010(24)
- [6].1.2%烟碱·苦参碱乳油对丽长角巢蛾的防治试验[J]. 绿色科技 2020(11)
- [7].苦参碱阴道膨胀栓治疗慢性盆腔炎的效果研究[J]. 当代医药论丛 2020(12)
- [8].苦参碱抗肿瘤机制的分子生物学研究进展[J]. 医学信息 2018(19)
- [9].苦参碱及衍生物的生物活性和合成研究进展[J]. 鲁东大学学报(自然科学版) 2015(04)
- [10].不同浓度3%苦参碱对五味子园天幕毛虫的防治效果[J]. 防护林科技 2014(01)
- [11].鞣酸苦参碱治疗慢性腹泻50例临床疗效观察[J]. 亚太传统医药 2012(12)
- [12].基于数据分析苦参碱对肝脏的作用[J]. 浙江中西医结合杂志 2019(01)
- [13].苦参碱金属配合物的合成及抑菌活性研究[J]. 西北农业学报 2018(03)
- [14].采用苦参碱防治樟叶蜂幼虫的效果分析[J]. 中国园艺文摘 2015(04)
- [15].羟基苦参碱消毒相关性能研究[J]. 中国消毒学杂志 2010(05)
- [16].苦参碱中枢药理作用的研究进展[J]. 中国现代药物应用 2009(01)
- [17].苦参碱止痒乳药效学研究[J]. 中国药师 2008(01)
- [18].中草药提取物苦参碱在农业生产病虫害防治领域中的应用[J]. 中兽医学杂志 2017(06)
- [19].新型苦参碱衍生物的水相合成及其晶体结构（英文）[J]. 有机化学 2018(04)
- [20].苦参碱抗炎和免疫抑制药理作用的研究进展[J]. 抗感染药学 2018(05)
- [21].0.5%苦参碱防治梨木虱的田间试验[J]. 落叶果树 2015(06)
- [22].苦参碱洗剂治疗脂溢性皮炎52例[J]. 环球中医药 2016(04)
- [23].苦参碱在妇科疾病方面的实验及临床研究进展[J]. 基层医学论坛 2015(04)
- [24].苦参碱抗肿瘤活性研究进展[J]. 世界最新医学信息文摘 2019(46)
- [25].苦参复合种植类型比较分析[J]. 山西农业科学 2017(11)
- [26].苦参碱药理作用研究进展[J]. 实用中医药杂志 2012(05)
- [27].1.3%苦参碱防治茶毛虫药效试验[J]. 现代农业科技 2011(08)
- [28].苦参碱联合甲氰咪胍治疗十二指肠溃疡出血疗效观察[J]. 中国医疗前沿 2010(16)
- [29].0.5%苦参碱防治棉田棉铃虫药效试验初报[J]. 石河子科技 2010(05)
- [30].复方苦参碱加中药治疗肝癌35例临床分析[J]. 中外医疗 2009(15)