导读:本文包含了固醇载体蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:棉花,黄萎病,枯萎病,固醇载体蛋白
固醇载体蛋白论文文献综述
张志远[1]（2015）在《杀菌蛋白基因（Hcm1）和陆地棉固醇载体蛋白基因（GhSCP2D）在棉花中的功能分析》一文中研究指出棉花是世界性的重要经济作物,产生的天然纤维是重要的纺织工业原料。然而,由于环境恶化,棉花在其生长区域频繁遭受着干旱、高盐、低温等非生物以及病害等生物胁迫的侵袭,特别是棉花的黄萎病,被誉为棉花的癌症,严重影响了棉花的生长发育和产量。陆地棉是我国棉花的主栽品种,占棉花栽培面积的95%以上,然而在这些陆地棉主栽品种中,抗逆性好、抗病性强和纤维品质优良的品种并不多。特别是抗黄萎病品种的培育,由于在陆地棉中找不到免疫或高抗的黄萎病抗源,一直是棉花育种家的一大难题。通过研究棉花抗逆抗病机制,利用基因工程的方法来培育优良的棉花新品种将是今后棉花育种的主要方向。杀菌蛋白Hcm1是一个由诱导植株产生过敏反应的Harpinxooc蛋白和抑制病菌生长的抗菌肽(CecropinA)与蜂毒肽(Melittin)通过活性结构域结合的一种新型蛋白,该蛋白在烟草上能够诱导产生过敏性反应,在体外能够抑制多种病原菌的生长。利用基因枪的技术,我们在洋葱表皮细胞瞬时表达Hcm1-GFP的融合表达载体,实验结果显示该蛋白定位于植物细胞的整个膜系统上。为了验证Hcm1的抗病性,把含有Hcm1基因的CaMV35S组成性表达启动子驱动的植物过量表达载体,通过农杆菌介导的方.法导入到陆地棉W0中,获得四个转基因纯合株系。Southern杂交分析表明,这四个转基因株系含有一个至叁个拷贝不等。Western杂交表明,四个转基因株系中Hcm1都能够得以表达出蛋白。温室和田间的枯萎病和黄萎病抗病性鉴定表明,四个转基因株系的抗病性都得到明显提高,说明转Hcm1基因赋予了转基因植株多种抗病性。H2O2含量测定发现,相对于受体W0,转基因植株中的H2O2含量提高,然而抗病基因NPR1,PR1,HSR203J和HIN1的表达量并没有明显的提高。在接种黄萎病菌后,转基因植株活性氧的含量在0-12小时迅速提高,出现两个峰值,而受体W0的过氧化氢含量缓慢提高。转基因植株在第二个峰值后出现坏死性细胞(过敏性反应),并且抗病基因NPR1,PR1,HSR203J和HIN1的表达量与对照相比迅速升高。这些结果说明,杀菌蛋白Hcm1中的Harpinxooc蛋白可能使植物处于一种抗病的引发态(priming),当病原菌侵染时,转Hcm1植物快速启动植物的抗病反应,以阻止病原菌进一步侵染。为了研究Hcm1蛋白抑制枯萎病菌和黄萎病菌的能力,我们在大肠杆菌中原核表达Hcm1,发现粗提蛋白对枯萎病菌和黄萎病菌的生长有显着的抑制作用。我们提取转基因植株的蛋白,实验表明从转Hcm1基因植株中提取的蛋白同样具有抑制枯萎病菌和黄萎病菌生长的作用。为了研究Hcm1蛋白在植物体内抑制病菌的能力,我们使用带绿色荧光蛋白(Green fluorescentprotein,GFP)的V991分别接种转基因植株和受体W0,通过观察荧光信号的强弱确定黄萎病菌在植物体内的含量。结果显示,转基因植株体内的荧光信号明显弱于受体W0,说明转基因植株中的黄萎病菌的量少于对照W0。我们以接黄萎病菌15天的转基因植株和对照W0植株的基因组DNA为模板,利用定量RT-PCR的方法研究转基因棉花和对照各个组织器官中的黄萎病菌的含量的差异,结果显示转基因植株中的黄萎病菌的量少于对照W0,说明Hcm1能够有效抑制黄萎病菌在棉花体内的扩展。棉纤维是世界上最重要的纺织原料之一,是由种子胚珠外表皮细胞经过一系列发育调控形成,其单细胞结构为研究相关基因在发育中的功能提供了一个良好的实验系统。阐明棉纤维发育重要基因功能对理解单细胞结构的棉纤维发育机理,进而通过分子育种手段改良棉纤维品质具有重要意义。我们筛选陆地棉标准系TM-1纤维起始、伸长及次生壁加厚时期的差异表达基因,获得了一个与棉纤维发育相关的CDS序列,28K_178_ALL。经BLAST发现该序列是一个与拟南芥固醇载体蛋白(AtSCP2)高度相似的陆地棉固醇载体蛋白。利用本实验室测序的陆地棉TM-1序列,我们共发现六个固醇载体蛋白。我们从陆地棉共克隆出四个表达的固醇载体蛋白基因,分别命名为GhSCP1D、GhSCP2D、GhSCP3A 和 GhSCP3D,其中GhSCP2D是我们发现的28K_178_ALL。氨基酸序列分析发现,GhSCP2D、GhSCP3A和GhSCP3D含有过氧化物酶体信号肽1(PTS1),而GhSCP1D则由于终止密码子的突变导致无法预测出信号肽。我们构建GhSCP-GFP融合表达载体,利用PEG介导的方法导入到棉花原生质体中,发现GhSCP1D定位于叶绿体,其它叁个基因定位于过氧化物酶体。RNA-seq数据分析和定量结果显示GhSCP2D在棉纤维特异表达,在5DPA的表达量最高,其它叁个基因在子叶中优势表达。这四个基因都受蔗糖诱导,特别是GhSCP2D基因。为了研究陆地棉固醇载体蛋白在棉纤维发育中的功能,我们构建GhSCP2D的反义表达载体,通过农杆菌介导的方法导入到陆地棉W0中,获得上述载体转化的转基因棉花植株。对每个再生单株进行NPTⅡ和启动子-基因特异引物的PCR检测,经过连续3个世代的选择,共获得3个转基因纯合株系。定量RT-PCR分析发现3个转基因株系表达均显着下降,说明在转基因株系中,该基因在纤维发育时期的表达被抑制。纤维品质检测发现,与受体W0相比,转基因棉花纯系其纤维强度和细度有小幅降低,而纤维长度显着变短。根据拟南芥的报道,我们推测固醇载体蛋白与蔗糖的运输有关。蔗糖含量测定发现,转基因棉花5DPA纤维中的蔗糖含量与W0相比显着降低,说明抑制GhSCP2D的表达导致蔗糖运输受阻。蔗糖通过共质体途径(胞间连丝)或者质外体途径(需要蔗糖转运蛋白的协助)进入棉纤维细胞。植物中蔗糖转运蛋白分为蔗糖载体蛋白和SWEETs蛋白,在四倍体陆地棉中,共有六个蔗糖载体蛋白基因和21个SWEETs基因。RNA-seq数据分析和定量结果发现,转运蔗糖的蔗糖载体蛋白基因和SWEETs基因在陆地棉的5DPA的纤维中表达量极低,所以GhSCP2D调控共质体途径的蔗糖运输。在转GhSCP2D基因的植株和受体W0中,我们发现蔗糖载体蛋白基因和SWEETs基因的表达显着升高,这些结果进一步说明GhSCP2D通过共质体途径而非质外体途径影响蔗糖的运输。通过以上结果我们推测蔗糖进入蔗糖细胞两个途径具有相互补偿效应,当共质体途径的蔗糖运输受阻时,质外体途径(蔗糖载体蛋白的表达量提高)补偿共质体途径蔗糖运输的损失。共质体途径的蔗糖运输取决于胞间连丝通透性,而胞间连丝通透性由胼胝质和H202调节。H2O2可以通过增加分枝和孪生的胞间连丝的数量增加胞间连丝通透性或者诱导胼脉质在胞间连丝的沉积降低胞间连丝的通透性。通过测定转基因植株和受体W0纤维中H202含量发现,H202含量与对照W0相比显着提高,说明GhSCP2D很有可能通过调节胼胝质的在胞间连丝的沉积影响蔗糖的运输。GhMYB9编码一个R2R3MYB转录因子。定量RT-PCR结果显示,GhMYB9在棉花纤维和花器官中优势表达。为了研究该基因的调节机制,我们分离出这个基因1487bp的启动子序列。调控元件分析发现1487bp区域内含有启动子核心的调控元件(TATA-box,CAAT-box)和转录起始位点(TSS)。我们把一个全长和两个缺失片段驱动GUS的pBI121载体导入到陆地棉W0中,研究其表达模式。GUS染色结果显示,GUS基因主要在转基因棉花的种子,纤维和花器官中表达。GUS活性也测定,在纤维、雄蕊和雌蕊中,GUS活性显着高于其它组织器官。通过启动子的缺失片段分析,我们发现GhMYB9受生长素诱导,并且受生长素诱导的区域位于启动子-1,231到-860之间。(本文来源于《南京农业大学》期刊2015-06-01）
楚璞,翟丽娜,管荣展[2]（2015）在《甘蓝型油菜固醇载体蛋白2基因BnSCP-2的克隆与表达》一文中研究指出固醇载体蛋白2(SCP-2)是一类小分子碱性蛋白,参与细胞内脂质运输、脂肪酸代谢以及过氧化物酶体β-氧化等过程。利用同源序列设计引物进行PCR扩增,克隆得到甘蓝型油菜固醇载体蛋白2基因的c DNA序列,命名为BnSCP-2。BnSCP-2的开放阅读框长372bp,编码一个由123个氨基酸残基组成的蛋白质,预测的蛋白质相对分子质量为13.52kD,等电点为9.35。SCP-2蛋白氨基酸序列非常保守,系统进化分析表明BnSCP-2与拟南芥SCP-2同源性最高。荧光实时定量PCR结果表明BnSCP-2在检测的各个组织均有表达,其中花和花蕾中的表达量最高;赤霉素、细胞分裂素和脱落酸等可显着诱导幼苗中该基因的表达,推测该基因可能参与调控幼苗生长发育。(本文来源于《中国油料作物学报》期刊2015年01期）
胡水旺,孙明晶,夏高晓,邓鹏,姜勇[3]（2010）在《小鼠固醇载体蛋白2原核表达载体的构建与表达纯化》一文中研究指出目的构建小鼠固醇载体蛋白2(SCP-2)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化获得具有活性的融合蛋白,为进一步研究SCP-2的生物学功能提供基础。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到鼠SCP-2编码序列,然后将该编码序列克隆到带有His标记的载体pET14b上,重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,用镍离子亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性,然后切取分子量正确的条带用SDS-PAGE及质谱技术进行鉴定。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。融合蛋白表达纯化后获得了分子量约59kD的融合蛋白,符合预期大小,并经质谱分析证明该融合蛋白的表达正确。结论成功构建了带His标签的SCP-2原核表达载体,并成功表达及纯化出该融合蛋白,为深入研究SCP-2的相关生物学功能提供了一个重要的工具。(本文来源于《解放军医学杂志》期刊2010年10期）
安国顺,王海梅,巴图乌拉,王俊峰,倪菊华[4]（2006）在《C57BL/6小鼠胆结石形成中固醇载体蛋白2的mRNA水平和胆固醇饱和指数增高》一文中研究指出目的观察C57BL/6鼠胆囊结石形成过程中肝固醇载体蛋白2(SCP2)mRNA水平及胆囊胆汁中胆固醇饱和指数的变化。方法C57BL/6鼠20只,分为结石组和对照组。对照组喂普通饲料,结石组采用1%的胆固醇饮食4周;RT-PCR方法检测肝SCP2 mRNA水平的变化;全自动生化仪检测胆脂,并计算胆固醇饱和指数。结果胆囊结石组肝SCP2 mRNA水平显着升高,胆汁胆固醇饱和指数亦显着增加。结论肝SCP2的表达及胆汁CSI的增高呈正相关。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2006年10期）
秦咏梅,J,Kalervo,HILTUNEN[5]（2002）在《过氧物酶体多功能酶2中固醇载体蛋白2结构域的功能》一文中研究指出过氧物酶体多功能酶 (包括Ⅰ型、Ⅱ型 ,简称MFE1、MFE2 )在哺乳类动物的脂类代谢中发挥其重要作用 .MFE1具有 2 烯酰CoA水合酶 1和 (3S) 羟脂酰CoA脱氢酶的活性 ,而MFE2具有 2 烯酰CoA水合酶 2和 (3R) 羟脂酰CoA脱氢酶的活性 ,两者均催化烯酰CoA在过氧物酶体β 氧化途径中的第 2步和第 3步反应 .MFE1与MFE2的氨基酸序列不具有任何同源性 ,并且它们的底物特异性也不相同 .比较哺乳类MFE1及酵母MFE2发现 ,哺乳类MFE2羧基末端带有由 12 5个残基组成的固醇载体蛋白 2 (简称SCP2 )结构域 ,其功能是未知的 .为了研究SCP2结构域在MFE2中的功能 ,将人MFE2、MFE2ΔSCP2 (删除MFE2中的SCP2 )、脱氢酶结构域、水合酶结构域以及SCP2结构域分别在E .coli中表达 ,并经纯化得到相应的重组蛋白 .通过测定 2 烯酰CoA水合酶 2和 (3R) 羟脂酰CoA脱氢酶对烯酰CoA的催化活性发现 ,带有SCP2结构域的重组蛋白的酶活力及催化效率高于删除SCP2的突变体蛋白 .实验结果表明 ,SCP2结构域可能通过增强MFE2与脂酰CoA的结合力 ,使得MFE2发挥最有效的催化活力(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2002年05期）
秦咏梅[6]（2001）在《过氧化酶体多功能酶2(MFE2)中固醇载体蛋白-2(SCP-2)结构域的功能研究》一文中研究指出在真核细胞中,过氧化酶体是无处不在的.它的形态为椭圆或圆形,直径在0.1-1.5微米,由单层膜包围着,从而与胞液分隔开来.1973年Goldfischer首次发现在人肝细胞的过氧化酶体中因过氧化酶体出现异常而引起的脑-肝-肾功能障碍,称之为Zellweger综合症.这一发现显示了氧化酶体积极参与体内极为重要的生理活动.随着对过氧化酶体功能的深入探索和研究,到目前为止,已于过氧化酶体的基质中发现了(本文来源于《中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集》期刊2001-09-01）
固醇载体蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
固醇载体蛋白2(SCP-2)是一类小分子碱性蛋白,参与细胞内脂质运输、脂肪酸代谢以及过氧化物酶体β-氧化等过程。利用同源序列设计引物进行PCR扩增,克隆得到甘蓝型油菜固醇载体蛋白2基因的c DNA序列,命名为BnSCP-2。BnSCP-2的开放阅读框长372bp,编码一个由123个氨基酸残基组成的蛋白质,预测的蛋白质相对分子质量为13.52kD,等电点为9.35。SCP-2蛋白氨基酸序列非常保守,系统进化分析表明BnSCP-2与拟南芥SCP-2同源性最高。荧光实时定量PCR结果表明BnSCP-2在检测的各个组织均有表达,其中花和花蕾中的表达量最高;赤霉素、细胞分裂素和脱落酸等可显着诱导幼苗中该基因的表达,推测该基因可能参与调控幼苗生长发育。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
固醇载体蛋白论文参考文献
[1].张志远.杀菌蛋白基因（Hcm1）和陆地棉固醇载体蛋白基因（GhSCP2D）在棉花中的功能分析[D].南京农业大学.2015
[2].楚璞,翟丽娜,管荣展.甘蓝型油菜固醇载体蛋白2基因BnSCP-2的克隆与表达[J].中国油料作物学报.2015
[3].胡水旺,孙明晶,夏高晓,邓鹏,姜勇.小鼠固醇载体蛋白2原核表达载体的构建与表达纯化[J].解放军医学杂志.2010
[4].安国顺,王海梅,巴图乌拉,王俊峰,倪菊华.C57BL/6小鼠胆结石形成中固醇载体蛋白2的mRNA水平和胆固醇饱和指数增高[J].基础医学与临床.2006
[5].秦咏梅,J,Kalervo,HILTUNEN.过氧物酶体多功能酶2中固醇载体蛋白2结构域的功能[J].中国生物化学与分子生物学报.2002
[6].秦咏梅.过氧化酶体多功能酶2(MFE2)中固醇载体蛋白-2(SCP-2)结构域的功能研究[C].中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集.2001