膜荚黄芪亲缘关系RAPD分析及有效成分的比较研究

论文摘要

本研究以16份膜荚黄芪为材料,应用RAPD分子标记技术,进行膜荚黄芪的亲缘关系研究。同时,本研究采用紫外分光光度法测定多糖、总皂苷及黄酮含量,根据化学成分含量分析结果,对不同产地的膜荚黄芪种质资源进行评价。目的是为膜荚黄芪的杂交育种、种质改良和合理栽培提供理论基础。本研究的主要结果如下:1.通过模板DNA、引物、dNTP、MgCl2及Taq DNA聚合酶浓度对RAPD反应探索建立了膜荚黄芪RAPD反应优化体系。即在20μL反应体积中,模板DNA 5ng,引物0.4μmol/L,dNTP 150μmol/L,MgCl2 2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.5 unit,1×Buffer;反应程序为预变性94℃5min,94℃45s、36℃60s、72℃90s共循环40次,最后72℃延伸7min。2.应用RAPD技术对16份膜荚黄芪种质资源进行分析,从200条随机引物中筛选出12条引物,共扩增出148条带,其中127条为多态带,多态性比率为85.8%,多态性比率较高。对16份膜荚黄芪不同种源进行RAPD扩增,根据遗传距离进行聚类分析结果,将其为3类:第一类为野生黄芪;第二类为华北黄芪,包括山西辉远和内蒙古包头;大部分属于第三类,为东北黄芪。3.不同种质的有效成分含量差异极显著。野生黄芪中多糖、总皂苷及黄酮含量显著高于所有栽培黄芪;栽培黄芪中,引自吉林通化膜荚黄芪多糖含量最高,但总皂苷和黄酮含量较低;引自吉林白山膜荚黄芪虽然多糖含量较低,但皂苷和黄酮含量在栽培黄芪中最高。因此,需根据不同栽培目的选用不同的种质作为繁殖材料。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 一、黄芪研究概况
• 二、RAPD技术的研究进展
• 三、研究目的和意义
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 试验方法
• 1.4.1 RAPD分析
• 1.4.1.1 主要溶液的配制
• 1.4.1.2 膜荚黄芪总DNA的提取
• 1.4.1.3 DNA检测
• 1.4.1.4 RAPD反应成分用量
• 1.4.1.5 PCR扩增条件
• 1.4.1.6 PCR产物的检测
• 1.4.1.7 RAPD反应的引物筛选
• 1.4.1.8 RAPD数据的处理和分析
• 1.4.2 有效成分分析
• 1.4.2.1 黄芪多糖的提取
• 1.4.2.2 总皂苷的提取
• 1.4.2.3 黄酮的提取
• 1.4.2.4 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 RAPD反应体系优化
• 2.1.1 膜荚黄芪总DNA的提取
• 2.1.2 模板浓度筛选
• 2.1.3 引物浓度筛选
• 2.1.4 dNTP浓度筛选
• 2.1.5 MgCl2浓度筛选
• 2.1.6 Taq聚合酶浓度筛选
• 2.2 膜荚黄芪种质资源的亲缘关系分析
• 2.3 有效成分分析
• 2.3.1 黄芪多糖
• 2.3.2 总皂苷
• 2.3.3 黄酮
• 3 讨论
• 3.1 RAPD反应条件优化
• 3.2 RAPD遗传多样性分析
• 3.3 黄芪有效成分分析
• 4 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢