小鼠胚胎发育不同时期心脏差异蛋白质组分析

论文摘要

目的: 心脏发育是一复杂的过程,涉及许多蛋白质的参与。本研究运用蛋白质组相关研究技术,分析妊娠 14d、16d 和 18d 胎鼠心脏蛋白质组,重点研究 14d、16d、18d 胎心蛋白质差异表达,从而发现不同发育时期蛋白的动态变化,探讨心脏发育的分子机制及先天性心脏病的发病机制。 方法: 1、建立 NIH 小鼠妊娠动物模型,分离妊娠 14d、16d 和 18d 胎鼠心脏,-80℃冰箱保存。 2 、 运 用 二 维 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 （two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE）技术,分离妊娠 14d, 16d和 18d 不同时期的胎鼠心脏蛋白质组,考马斯亮蓝染色,PDQuest 软件进行图像分析。 3、对 14 个妊娠 14d、16d、18d 胎心差异表达候选蛋白斑点进行胶内酶切,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser disorption/ionization-time of flight-mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）分析酶切片段,得到肽指纹图（peptide massea fingerprint, PMF）,利用 Matrix Science 公司提供的 PMF 鉴定程序（Mascot: Peptide Mass Fingerprint）进行查询,每个查询得到一个分值（Mowse Score）,根据分值计算概率来评价每个检索结果是否有意义。通常可接受的域值是:一个事件随机发生的概率小于 5%重庆医科大学硕士研究生学位论文 4（p<0.05）,则该事件为有意义。结果:1、2-DE 图谱显示,胎鼠心脏蛋白质分子量（Mw）主要集中在 20至 116 之间,等电点（pI）主要分布在 pH4.0-8.5 之间。PDQuest 软件分析图像,结果显示妊娠 14d 胎鼠心脏大约有 565 个蛋白点、16d 胎鼠心脏大约有 711 个蛋白点、18d 大约有 773 个蛋白质点。其中妊娠 16d胎鼠心脏蛋白点与 14d 相比,约有 22 个蛋白点有 2 倍以上的上调,8个蛋白点下调。妊娠 18d 胎心与 14d 相比约有 39 个蛋白点有 2 倍以上的上调,11 个点有超过 2 倍以上的下调。2、选择 14 个差异表达候选蛋白质点的 PMF 在国际互联网上查询,有四个蛋白质点获得有意义的结果（p <0.05）,分别为热休克蛋白 60（Heat shock protein 60,Hsp60）、细胞角蛋白 G6（cytoskeletal 6G ）和 两 个 蛋 白 点 均 鉴 定 为 丝 分 裂 原 活 化 蛋 白 激 酶 激 酶 激 酶 4（Mitogen-activated protein kinase kinase kinase4,MAPKKK4 或MEKK4）。结论:1、在小鼠胚胎的发育中,胚胎心脏的分化和功能的完善需要大量的蛋白质参与。2、Hsp60 是一个分子量为 60kDa 的蛋白质,普遍存在于原核细胞和真核细胞中,主要存在于细胞质和线粒体基质中,其一是起分子伴侣（moleculer chaperonin ）的作用,即对新生蛋白质进行折叠、转运和定位。当机体受到协迫时,热休克蛋白大量合成,以恢复变性蛋白或凝集蛋白的天然构像;其二调控细胞分裂和细胞凋亡。在心脏发育不同时期的表达,对心脏细胞生长和发育以及功能的完善和实现具有重要作用。3 、 MAPKKK4 是 参 与 构 成 细 胞 主 要 信 号 传 递 系 统 MAPK

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：小鼠胚胎发育不同时期心脏差异蛋白质组分析
• 前言
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 文献综述：蛋白质组学在心脏疾病研究中的应用
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文和出版的书籍
• 攻读硕士学位期间申报科研基金情况