论文题目: 力达霉素诱导肿瘤细胞周期阻滞的分子机制及其信号传导通路研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 微生物与生化药学
作者: 刘霞
导师: 邵荣光
关键词: 力达霉素,细胞周期阻滞,乳腺癌,结肠癌
文献来源: 中国协和医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 力达霉素(lidamycin，LDM)，原名C-1027，烯二炔类(enediyne)抗生素家族成员之一，分离自我国的一株链霉菌(Streptomyces globisporus C-1027)。其分子由一个酸性的辅基蛋白和一个发色团结合而成，发色团是LDM的主要活性部分，起着直接断裂DNA的作用，而辅基蛋白的主要作用是保护发色团。以往研究表明，LDM具有高度的抗肿瘤活性，目前正进行临床Ⅰ期试验。作为DNA损伤剂，LDM可以诱导细胞周期阻滞、凋亡和裂亡。但是LDM诱导周期阻滞的作用机制及其信号传导通路到目前为止还未进行过详细研究。本研究的目的是阐明LDM诱导周期阻滞的分子机制及信号调节通路，从而为LDM的临床应用提供更深入的理论依据和治疗方案。 一、LDM诱导人乳腺癌细胞周期阻滞的作用 1．MTT法检测LDM对MCF-7细胞的增殖抑制作用与药物作用时间的关系。LDM分别作用2h、4h和24h后，撤去药液继续培养到48h，或LDM一直作用48h，结果显示不同的给药时间对IC50值无明显影响，分别为0.46±0.14nM、0.32±0.12nM、0.24±0.08nM和0.48±0.11nM，说明在48h之内LDM抑制MCF-7细胞生长的能力与药物暴露时间无关。 2．生长抑制实验结果表明LDM作用24h，再撤去药液继续培养3天，MCF-7和MCF-7／DOX细胞的生长被明显抑制，当浓度为0.1nM时，对两种细胞的生长抑制率分别为89.93±4.5％和89.77±3.9％(p＞0.05)，说明多药耐药细胞对LDM同样敏感。 3．流式细胞仪结果显示LDM对MCF-7细胞的周期调节作用与浓度有关。在0.01nM时，LDM诱导G1期阻滞；但在较高浓度时(0.1～1nM)，LDM可同时诱导G1和G2／M期阻滞。而在MCF-7／DOX细胞中，LDM仅诱导G2／M期阻滞。 由于传统的PI染色，不能区分G2和M期，因此我们采用MPM-2／PI双参数染色法进一步分析LDM对MCF-7细胞周期的影响，结果表明LDM将MCF-7细胞阻滞在G2而不是M期。 4．1nM LDM可增加MCF-7细胞p53和p21的表达，并呈时间依赖性，而且
论文目录:
英文缩略语
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 实验材料与方法
一.实验材料
二.实验仪器
三.实验方法
第二部分 实验结果
一.LDM对人乳腺癌细胞的周期阻滞作用
1.MTT法检测LDM作用时间与药效的关系
2.LDM对MCF-7细胞及多药抗药细胞MCF-7／DOX的生长抑制作用
3.细胞周期分析
3.1 LDM对乳腺癌细胞周期分布的影响
3.2 MPM-2／PI双参数染色法检测LDM对MCF-7细胞周期分布的影响
4.Western blot检测LDM对MCF-7细胞p53和p21蛋白表达的影响
5.Western blot检测LDM对乳腺癌细胞周期调控蛋白表达的影响
6.RT-PCR检测cyclin B1 mRNA水平
7.LDM对cyclin B1细胞内分布的影响
二.LDM对人结肠癌细胞HT-29的周期阻滞作用
1.MTT法检测LDM作用时间与药效的关系
2.细胞计数法检测LDM对HT-29细胞的生长抑制作用
3.LDM对HT-29细胞形态的影响
4.细胞周期分析
4.1 LDM对HT-29细胞周期分布的影响
4.2 MPM-2／PI双参数流式细胞染色法检测LDM对HT-29细胞周期分布的影响
5.Western blot检测LDM对HT-29细胞周期调控蛋白表达的影响
6.LDM对cyclin B1亚细胞分布的影响
三.LDM对结肠癌HCT116细胞周期的影响
1.PI染色流式细胞仪检测LDM对HCT116细胞周期分布的影响
2.Western blot检测LDM对HCT116细胞周期调控蛋白表达的影响
四.LDM周期阻滞作用与MAPKs的关系
1.Western blot检测MCF-7和HT-29细胞p38 MAPK表达变化
2.流式细胞仪检测p38 MAPK的表达
3.Western blot检测LDM对HT-29和HCT116细胞MAPKs表达的影响
4.抑制ERK和p38对LDM周期阻滞作用的影响
5.MTT法检测合用SB203580后HT-29细胞对LDM的敏感性
五.LDM诱导肿瘤细胞衰老的作用
六.NRas低表达的HepG2细胞对LDM的敏感性研究
第三部分 讨论与结论
一、讨论
二、结论
参考文献
文献综述
致谢
发布时间: 2006-10-13
参考文献
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