AgNO3在梨离体叶片不定梢诱导培养中效应的研究

论文摘要

本研究以四川主栽梨品种‘金水’（Pyrus pyrifolia Nakai.cv.Jinshui）和‘金花’（Pyrus brestchneideri Rehd.cv.Jinhua）为材料,建立起无菌繁殖体系,并从中取得叶片进行离体培养,通过均匀设计法选择不同培养基和添加不同外源激素,筛选出梨叶片不定梢再生的最适条件。在选出的最佳培养基上添加不同浓度的AgNO3,观察叶片愈伤组织的诱导、分化过程中外观形态变化,分析不同AgNO3浓度处理后叶片内抗氧化物酶、自由基、可溶性蛋白质以及内源多胺的变化规律。通过AgNO3对梨叶片不定梢诱导过程中细胞分化、器官发生以及生理生化变化的影响分析,得到如下结果:（1）利用均匀设计方法筛选‘金水’和‘金花’叶片不定梢诱导最适培养条件,以不定梢再生率、平均每叶梢数以及不定梢再生力三个指标作为考察依据,发现:‘金花’最适培养条件为NN69+BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L,不定梢诱导率达到40.49%。‘金水’最适培养条件为NN69+TDZ1.0mg/L+NAA0.6mg/L,不定梢诱导率达到58.07%。（2）通过对叶片不定梢发生过程的外观形态观察发现:不定梢发生经历了四个阶段。第一阶段,叶边缘逐渐隆起肿胀,叶脉膨大并在切伤处、叶柄端处产生少量白色愈伤组织。第二阶段,愈伤组织大量发生且少部分愈伤组织上出现肉眼可观察到的淡黄色芽点。第三阶段为不定芽产生的高峰期。第四阶段,产生不定芽的叶片数逐渐减少,大部分叶片进入不定芽伸长期。（3）0.1mg/L AgNO3能明显提高‘金水’叶片不定梢再生率和再生数,而对‘金花’叶片不定梢再生有效促进的AgNO3浓度范围为0.1～0.5mg/L。（4）通过对叶片诱导过程中不同AgNO3浓度与抗氧化物酶及自由基的关系研究表明:在暗培养期间,叶片中CAT和POD活性均有较大幅度变化,特别是经0.1mg/L AgNO3处理后,‘金花’叶片中POD活性及‘金水’叶片中CAT活性增幅均高于其余三个处理。与此同时,叶片中O2-产生速率和H2O2含量也会增加但上升幅度不及对照。进入光培养阶段后,添加适当浓度的AgNO3可提高叶片原有的SOD峰值,且H2O2含量和O2-产生速率随之下降,但较高浓度AgNO3处理易引起H2O2含量和O2-产生速率回升。虽然品种间抗氧化物酶活性变化不完全一致,但通过比较发现0.1mg/L AgNO3对提高‘金花’和‘金水’叶片抗氧化物酶活性效果最佳。（5）不同浓度AgNO3处理后叶片内可溶性蛋白含量随叶片不定梢的发生而不断升高。暗培养期间,各处理间无显著差异,进入不定梢发生期后,附加0.1mg/L AgNO3的‘金水’和‘金花’叶片中可溶性蛋白含量一直与对照呈显著差异,且在35d时叶片可溶性蛋白含量达到峰值。（6）对不定梢诱导过程中内源多胺含量研究表明:多胺含量会随着细胞分裂分化迅速增加,其中腐胺含量在培养5d时形成高峰,精胺在20d时出现峰值,而亚精胺在培养过程中两次出现峰值,由此推断腐胺、精胺和亚精胺对梨叶片愈伤组织细胞分裂和分化起着各自独立又有所关联的调节作用。经0.1mg/LAgNO3处理后叶片内源多胺含量与对照相比明显增多。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1.前言
• 2.文献综述
• 3在植物离体培养中应用'>2.1AgNO₃在植物离体培养中应用
• 2.1.1 促进不定芽再生
• 2.1.2 影响不定根的形成
• 2.1.3 促进原生质体的分裂与分化
• 2.1.4 维持并促进胚性愈伤组织的形成和分化
• 2.1.5 促进花药胚状体的形成
• 3在遗传转化中的作用'>2.2 AgNO₃在遗传转化中的作用
• 3对梨叶片培养作用的研究'>2.3 AgNO₃对梨叶片培养作用的研究
• 3作用的因素'>2.4 影响AgNO₃作用的因素
• 2.4.1 基因型
• 2.4.2 处理时间及浓度
• 2.4.3 外植体类型
• 3作用机理的研究'>2.5 AgNO₃作用机理的研究
• 3、乙烯及多胺间关系的研究'>2.5.1 AgNO₃、乙烯及多胺间关系的研究
• 3引起酶活性变化的研究'>2.5.2 AgNO₃引起酶活性变化的研究
• 3引起培养物形态发生变化的研究'>2.5.3 AgNO₃引起培养物形态发生变化的研究
• 3.研究的目的和意义
• 4.材料和方法
• 4.1 试验材料
• 4.2 技术路线
• 4.3 试验方案及方法
• 4.3.1 梨叶片最适培养条件的筛选
• 4.3.1.1 材料建立
• 4.3.1.2 材料继代和增殖
• 4.3.1.3 梨叶片不定梢基本培养条件的筛选
• 3浓度的筛选'>4.3.1.4 最适AgNO₃浓度的筛选
• 4.3.2 梨叶片培养过程中生理生化变化的测定
• 4.3.2.1 超氧化物歧化酶的测定
• 4.3.2.2 过氧化物酶的测定
• 4.3.2.3 过氧化氢酶的测定
• 2O₂含量的测定'>4.3.2.4 H₂O₂含量的测定
• 4.3.2.5 超氧阴离子自由基产生速率的测定
• 4.3.2.6 可溶性蛋白质含量的测定
• 4.3.3 多胺的测定
• 4.4 实验数据统计分析
• 4.4.1 叶片不定梢的诱导
• 4.4.2 生理活性的测定
• 4.4.3 数据分析方法
• 5.结果分析
• 5.1 梨叶片不定梢的诱导
• 5.1.1 不定梢的发生过程
• 5.1.2 不定梢诱导结果与分析
• 5.1.2.1 ‘金花'梨叶片不定梢再生培养条件分析
• 5.1.2.2 ‘金水'梨叶片不定梢再生培养条件分析
• 3处理对梨叶片再生不定梢的影响'>5.1.3 不同浓度AgNO₃处理对梨叶片再生不定梢的影响
• 3对梨叶片培养过程中抗氧化物酶及活性氧的作用'>5.2 AgNO₃对梨叶片培养过程中抗氧化物酶及活性氧的作用
• 3对抗氧化物酶的作用'>5.2.1 AgNO₃对抗氧化物酶的作用
• 3对超氧阴离子自由基和过氧化氢的影响'>5.2.2 AgNO₃对超氧阴离子自由基和过氧化氢的影响
• 3对梨叶片培养过程中可溶性蛋白质及多胺的影响'>5.3 AgNO₃对梨叶片培养过程中可溶性蛋白质及多胺的影响
• 3对可溶性蛋白质的影响'>5.3.1 AgNO₃对可溶性蛋白质的影响
• 3对内源多胺的影响'>5.3.2 AgNO₃对内源多胺的影响
• 5.3.2.1 梨叶片不定梢发生过程中腐胺的变化动态
• 5.3.2.2 梨叶片不定梢发生过程中精胺的变化动态
• 5.3.2.3 梨叶片不定梢发生过程中亚精胺的变化动态
• 6.讨论与结论
• 6.1 均匀设计应用于梨叶片不定梢诱导研究的可行性
• 3浓度与梨叶片不定梢发生的关系'>6.2 AgNO₃浓度与梨叶片不定梢发生的关系
• 3浓度与梨叶片中抗氧化物酶的关系'>6.3 AgNO₃浓度与梨叶片中抗氧化物酶的关系
• 3浓度与梨叶片中可溶性蛋白的关系'>6.4 AgNO₃浓度与梨叶片中可溶性蛋白的关系
• 3浓度与梨叶片中多胺的关系'>6.5 AgNO₃浓度与梨叶片中多胺的关系
• 7.进一步研究的内容
• 8.参考文献
• 致谢
• 硕士学习期间发表文章
• 图版说明