葛根素对异丙肾上腺素诱导大鼠的心肌纤维化和心肌结缔组织生长因子表达的影响

论文摘要

目的:研究葛根素对异丙肾上腺素（isoprenaline,ISO）诱导大鼠的心肌纤维化和心肌结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）表达的影响。方法:采用ISO（5mg·kg-1·d-1×10d）皮下注射制作大鼠心肌纤维化模型,分早期和后期给予葛根素（100mg·kg-1·d-1）腹腔注射56天和46天,实验共8周。48只雄性SD大鼠随机分成四组:模型组（M组）16只;空白对照组（C组）8只;葛根素早期干预组（Pa组）12只;葛根素后期干预组（Pp组）12只。于实验末,大鼠处死的前一天进行超声心动图检查,检测左室舒张末内径（left ventricular internal diameter at end-diastole, LVIDd）、左室收缩末内径（left ventricular internal diameter at end-systole, LVIDs）、左室舒张末容积（left ventricle end-diastole volume, LVEDV）、左室收缩末容积（left ventricle end-systole volume, LVESV）、左室射血分数（left ventricle ejection fraction, LVEF）及缩短分数（fractional shortening, FS）。计算左室指数（左室重量/体重）,进行VG（Van Gieson）染色、免疫组化染色,分别测算胶原容积积分（collagen volume fraction, CVF）、CTGF蛋白和转化生长因子β1（transforming growth factor beta1,TGF-β1）蛋白含量,检测左室游离壁心肌组织中羟脯氨酸浓度,运用RT-PCR半定量分析左室游离壁心肌组织中CTGF mRNA和TGF-β1 mRNA水平。结果:实验末存活SD大鼠32只。①超声心动图结果:模型组大鼠LVEF和FS较空白对照组显著降低（P<0.01）,模型组大鼠左室心腔明显扩大,葛根素明显改善模型组大鼠左室收缩功能和减小模型组LVEDV,葛根素早期干预组大鼠LVEF和FS提高幅度较葛根素后期干预组更明显（分别P<0.05和P<0.01）,葛根素干预组大鼠LVIDd、LVEDV与空白对照组无显著差异。②心肌纤维化:模型组大鼠左室指数、左室心肌组织CVF和羟脯氨酸浓度均较空白对照组明显增加（P<0.01）,葛根素减少模型组大鼠左室指数、左室心肌组织CVF及羟脯氨酸浓度（P<0.01）,葛根素早期干预组大鼠左室指数、左室心肌组织CVF和羟脯氨酸浓度均较葛根素后期干预组减少（分别P<0.05、P<0.01和P<0.05）。③促纤维化细胞因子:与空白对照组比较,模型组大鼠左室心肌组织的CTGF和TGF-β1表达均明显增加（P<0.01）,葛根素降低模型组大鼠左室心肌组织CTGF和TGF-β1的过度表达,葛根素早期干预组大鼠左室心肌组织中CTGF和TGF-β1的表达均较葛根素后期干预组少。④相关分析:四组大鼠的左室心肌组织CTGF蛋白与左室心肌组织CVF和羟脯氨酸浓度呈正相关（P<0.05）。结论:葛根素减少ISO诱导大鼠的左室心肌间质胶原沉积和左室心肌组织中羟脯氨酸浓度,减轻和延缓ISO诱导大鼠的心肌纤维化,从而改善左心室收缩功能,这种作用机制可能是通过抑制左室心肌组织中CTGF、TGF-β1——促纤维化细胞因子的过度表达来实现。葛根素早期干预较后期干预效果更好。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 1.1 背景
• 1.2 葛根素的抗纤维化作用
• 第2章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 主要设备
• 2.1.3 主要试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 实验动物分组及给药方法
• 2.2.2 超声心动图检查
• 2.2.3 标本制备
• 2.2.4 心肌纤维化指标测定
• 2.2.5 免疫组织化学染色半定量分析左室心肌组织CTGF 蛋白、TGF-β1蛋白含量
• 2.2.6 RT-PCR 半定量分析左室心肌组织CTGF mRNA、TGF-β1 mRNA 水平
• 2.2.7 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 超声心动图结果
• 3.1.1 左室射血分数和缩短分数
• 3.1.2 左室舒张末内径和左室收缩末内径
• 3.1.3 左室舒张末容积和左室收缩末容积
• 3.2 心肌纤维化
• 3.2.1 左室指数
• 3.2.2 左室心肌CVF
• 3.2.3 左室心肌组织羟脯氨酸浓度
• 3.3 促纤维化细胞因子的表达水平——CTGF 和TGF-β1
• 3.3.1 左室心肌组织中CTGF 蛋白和TGF-β1 蛋白的含量
• 3.3.2 左室心肌组织中CTGF mRNA 和TGF-β1 mRNA 表达水平
• 3.3.3 左室心肌组织中CTGF 、CTGF mRNA 与左室心肌组织CVF、羟脯氨酸浓度的相关性
• 第4章 讨论
• 4.1 ISO 诱导心肌纤维化大鼠模型的制作
• 4.2 葛根素对ISO 诱导的心肌纤维化模型大鼠心肌纤维化、超声心动图结果和左室心肌组织CTGF 及TGF-β1 表达的影响
• 4.3 不足之处
• 第5章 结论
• 5.1 结论
• 5.2 创新之处
• 5.3 展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录A 实验步骤路线图
• 附录B 附图
• 附录C 综述
• 攻读学位期间的研究成果