人工诱导兴国红鲤单性发育研究

论文摘要

本文以兴国红鲤（Cyprinus carpio var Singuonensis）和银鲫（Crucican carp）为材料,探讨了人工诱导兴国红鲤单性发育的不同途径,同时对单性胚胎发育进行了研究。主要结论如下: 1.银鲫精子经紫外线照射后与兴国红鲤卵子受精,再进行休克处理使染色体加倍,获得兴国红鲤雌核发育二倍体。具体方法是:银鲫精子在紫外线照射剂量375mJ/cm2-750mJ/cm2,水温20.5℃-21.5℃,分别在受精后1min-3min、受精后21min-39min进行休克处理阻止第二极体排出或抑制第一次有丝分裂,热休克采取40.5℃-41℃处理1min-3min,冷休克4℃-6℃处理20min-40min,结果表明:UV照射剂量为500mJ/cm2（照射时间20min）对银鲫精子获得最佳灭活效果。受精后2min热休克或冷休克处理,可以诱导出极体雌核发育后代,分别获得10.3%和21.7%的出苗率;受精后27min进行热休克或受精后30min冷休克处理,可成功诱导出有丝分裂雌核发育后代,分别获得1.8%和4.3%的出苗率。极体雌核发育比有丝分裂雌核发育得到更多诱导成活后代,冷休克诱导效果优于热休克。雌核发育后代经染色体数目和形态学鉴定,与母本兴国红鲤表型一致。 2.银鲫卵子遗传失活与兴国红鲤成熟精子受精后经热休克处理,获得雄核发育二倍体克隆鱼。UV以38mJ/cm2-190mJ/cm2剂量分别照射浸泡在3种不同卵子保存液中的银鲫卵子,孵化水温19℃-21℃时,受精后24min-72min（每3min为一个梯度）进行热休克处理,将受精卵置于40.5℃-41℃温水中处理2min,以阻止第一次有丝分裂。结果表明:UV照射剂量为76mJ/cm2、使用EM卵子保存液时卵子获最佳灭活效果,单倍体诱导率达到57.2%;二倍化休克处理的时间在距受精后24min-42min和63min-72min出现二个诱导高峰,其中受精后27min获得20h时胚胎存活率47.3%和出苗率5.7%。经过形态学和染色体数目鉴定,诱导后代与父本兴国红鲤表型一致。 3.热休克人工诱导出兴国红鲤雄核发育、雌核发育单倍体、二倍体胚胎,在水温20.5℃-21.5℃下连续观察各种胚胎发育的时序及形态变化特征,并与鲤自交后代胚胎发育进行比较。结果发现:单倍体胚胎与二倍体胚胎的各期形态特征相似,发育时序延

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述
• 1 鱼类雌核发育研究进展
• 1.1 鱼类天然雌核发育
• 1.2 鱼类的人工雌核发育
• 1.3 雌核发育后代的检测与鉴定
• 1.4 雌核发育后代的存活能力与性比
• 1.5 鱼类雌核发育存在的问题分析
• 2 鱼类雄核发育研究进展
• 2.1 天然存在的异源杂交雄核发育现象
• 2.2 异源卵子人工诱导雄核发育的技术途径
• 2.3 异源杂交雄核发育二倍体的鉴定
• 2.4 关于异源杂交雄核发育成功诱导关键因素的分析
• 2.5 异源雄核发育后代的生物学效应
• 3 本项目研究的目的、意义和应用前景
• 第二章 兴国红鲤雌核发育研究
• 1 材料与方法
• 1.1 亲本的来源与选择
• 1.2 银鲫精子的遗传失活
• 1.3 雌核发育单倍体的二倍化
• 1.4 受精率、出苗效率的统计
• 1.5 雌核发育二倍体的鉴定
• 2 试验结果
• 2.1 银鲫精子的遗传灭活
• 2.2 极体雌核发育诱导结果
• 2.3 有丝分裂雌核发育诱导结果
• 2.4 不同雌核发育鱼苗的生存活力
• 2.5 雌核发育后代的鉴定及染色体分析
• 3 讨论与分析
• 3.1 紫外线照射对精子遗传灭活的影响因素分析
• 3.2 卵子加倍技术中休克参数的选择
• 3.3 异源精子的使用
• 3.4 雌核发育中不同核质关系的影响分析
• 第三章 兴国红鲤雄核发育研究
• 1 材料与方法
• 1.1 亲本来源与选择
• 1.2 卵子遗传灭活
• 1.3 二倍化诱导
• 1.4 受精率、出苗率的统计
• 1.5 雄核发育后代的染色体检测
• 1.6 雄核发育二倍体后代的鉴定
• 2 试验结果
• 2.1 银卿卵子的遗传失活
• 2.2 热休克处理二倍化时间
• 2.3 雄核发育后代的染色体分析
• 3 讨论与分析
• 3.1 紫外线照射对卵子灭活的影响
• 3.2 不同卵子保存液的使用效果分析
• 3.3 最佳二倍化时间的探讨
• 第四章 兴国红鲤单性生殖胚胎发育研究
• 1 材料与方法
• 1.1 亲本材料的选择
• 1.2 兴国红鲤单性发育单倍体和二倍体的产生
• 1.3 兴国红鲤单性发育后代和自交后代胚胎发育观察
• 2 试验结果
• 2.1 单倍体胚胎发育与单倍体综合症
• 2.2 二倍体胚胎发育
• 2.3 不同二倍体鲤鱼的胚胎发育孵化积温比较
• 3 讨论与分析
• 3.1 单性发育二倍体与单倍体胚胎发育差异分析
• 3.2 单性胚胎发育的受精特点及染色体加倍时间探讨
• 参考文献
• 图版说明
• 致谢