重组抗HER2人源化单克隆抗体抗肿瘤作用的主要药效学研究

论文摘要

重组抗HER2人源化单克隆抗体（ rhHER2-mAb）是一类靶向HER2（人类表皮生长因子）的单克隆抗体药物,主要用于治疗由过度表达的HER2（人类表皮生长因子）介导生长转移的人乳腺癌[13]。同类型的单克隆抗体药物之间的药物活性也有比较大的差异,本实验主要对哈药集团生物工程有限公司提供的重组抗HER2人源化单克隆抗体进行体内体外抗肿瘤的药效学评价。在本研究中,利用MTT试验法分别检测受试药在体外各暴露浓度对不同HER2表达量的人乳腺癌细胞以及人胃癌细胞的生长抑制效应与阳性药物赫赛汀的生长抑制作用。用ORIGIN50软件进行数据的整理与细胞生长曲线的绘制,得出半效抑制浓度(IC50,μg·ml-1)和实测最大抑制率(Imax,%),进行比较。复苏扩增相关细胞,消化收集肿瘤细胞,按照每只裸鼠接种一定数量的肿瘤细胞于裸鼠皮下,建立裸鼠移植瘤模型。按肿瘤体积随机将裸鼠分组并开始给药,给药途径为尾静脉注射。每2-3天测量裸鼠体重并用游标卡尺测量肿瘤长短径数据,给药后观察2周左右,试验结束时,颈部脱臼处死动物,剥离取出瘤块称重,拍照,依据肿瘤瘤重和相对体积的变化评价药物疗效。最后,通过免疫组织化学染色法检测MCF-7、MDA-MB-231、MS-1、BT474、Bcap37、MS-1等人乳腺癌细胞以及SGC7901人胃癌细胞这些受试细胞膜上的HER2受体表达情况。体外评价结果显示,重组抗HER2人源化单克隆抗体对多数受试细胞的生长抑制效应均呈现出良好的浓度依赖关系,重复试验结果一致,受试物设置浓度基本涵盖了药物效应窗口,半效浓度(IC50)范围为4.112μg·ml-1～759.9μg·ml-1,对受试细胞生长的最大抑制效应(Imax)的范围为46.8%～98.7%;阳性药紫杉醇在固定暴露浓度下(0.006μg·ml-1),对受试细胞生长抑制率的范53.9%91.7%;半效浓度(IC50)范围为12.51μg·ml-1～348.73μg·ml-1,最大抑制效应(Imax)的范围为57.7%91.7%。重组抗HER2人源化单克隆抗体与赫赛汀、以及固定浓度紫杉醇的作用强度是接近的。体内评价结果显示,受试药对MCF-7人乳腺癌移植瘤、Bcap-37人乳腺癌移植瘤、SGC7901人胃癌移植瘤和BT474人乳腺癌移植瘤有较强的抑制效应,尤其对人乳腺癌MCF-7和BT474细胞的裸鼠移植瘤作用明显,但对MS1人乳腺癌移植瘤的抑制效应较弱,原因可能与受试肿瘤细胞的HER2表达量有关。通过免疫组织化学免疫法对受试细胞膜上HER2受体表达量的观察,MCF-7、BT474、MDA-MB-231、MS-1、Bcap37、SGC7901等受试细胞中MCF-7、MDA-MB-231、BT474、Bcap37、SGC7901均有Her-2受体的表达,其中MDA-MB-231细胞有较高的表达,MS-1则没有明显的Her-2受体表达。这些结果与文献报道相符[47],解释了体内试验结果的优劣差异,重组抗HER2人源化单克隆抗体是以HER2为特定靶点,对HER2高表达受试细胞药效显著,对于低表达受试细胞则药效不明显。由于抗体类药物分离纯化工艺复杂,相同类抗体药物的抗肿瘤活性也是大不相同的[8,9]。本文对特定的重组抗HER2人源化单克隆抗体进行了系统的体内体外药效学评价,评价结果显示该重组抗HER2人源化单克隆抗体对于各类HER2高表达的肿瘤细胞的抑制生长作用都非常显著,与阳性对照药物赫赛汀、紫杉醇作用相似。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 第一部分：受试药物的体外评价结果
• 第二部分：受试药物的体内评价结果
• 第三部分：受试细胞的HER-2 受体表达
• 结论
• 讨论
• 参考文献
• 附录
• 个人简介
• 致谢