妊娠期肝内胆汁淤积症患者蜕膜及外周血中NK细胞生物学特性的研究

论文摘要

研究背景:妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）是妊娠晚期特有的并发症,以全身皮肤瘙痒、肝功能异常、伴有不同程度的黄疸为特征,其主要危及胎儿,易引起早产、胎儿窘迫、死胎、死产等。目前对于ICP确切的发病原因,以及宫内缺氧的机制尚未完全明确,迫切需要明确阐述ICP的发病原因,才有可能建立有效的预防、治疗措施。已有研究表明该病的发生与妊娠期母体免疫功能紊乱有关。近年来国内外提出了母胎界面这一概念,其核心内容是母胎界面由母体的子宫蜕膜和胎儿滋养层共同构成,母胎界面内的多种细胞成份及其分泌的细胞因子构成了特殊的母胎界面免疫微环境,在保护胎儿生长发育、免受母体的免疫排斥中起重要作用。在人类妊娠过程（尤其早期妊娠）中,NK细胞是蜕膜中最丰富的淋巴细胞,它与胚胎滋养层细胞直接接触,是唯一粘附于滋养层细胞表面的子宫淋巴细胞。dNK细胞主要分布于母体与胚胎接触的蜕膜,是母体直接识别胎儿抗原的免疫细胞,它的独特的表型及功能不但能维持母胎界面的免疫耐受,还能分泌一系列细胞因子促进蜕膜血管重建及Th1/ Th2平衡网络的维持。若dNK细胞的数量及功能失调则可能诱发病理妊娠。本课题研究ICP患者蜕膜及外周血中NK细胞的含量、表型、功能状态的变化,研究ICP患者蜕膜及外周血中NK细胞的Th1、Th2型细胞因子的分泌情况是否同时出现在局部免疫与系统免疫,为进一步研究母胎免疫耐受的形成机制、ICP患者母胎界面免疫微环境变化的细胞学及分子生物学机制提供良好的实验基础。探讨ICP患者全身系统与母胎界面局部免疫微环境变化的关系,无疑为ICP的发病机制提供新的解释。目的:检测ICP患者蜕膜及外周血中NK细胞的含量、表型、Th1/Th2型细胞因子表达、杀伤功能方面的变化,探讨ICP患者蜕膜及外周血中NK细胞独特的表型、功能及其与滋养细胞的相互识别关系在系统免疫与母胎界面免疫耐受之间的重要联系。方法:1)收取重度ICP患者（实验组,15例）和正常晚孕（对照组,15例）壁蜕膜组织及同一人外周血,机械研磨法联合密度梯度离心法分离出蜕膜单个核细胞,单纯密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞,流式细胞术检测蜕膜及外周血中NK细胞的含量及表型。2)收集重度ICP患者和正常晚孕胎盘组织各6例,RT-PCR技术检测两组胎盘滋养层中NKG2A的配体HLA-G, HLA-E和NKG2D的配体MICA mRNA的表达情况。3) ELISA法检测ICP组和正常晚孕组壁蜕膜及外周血单个核细胞上清中IFN-γ和IL-4的表达4)流式细胞术检测ICP组和正常晚孕组壁蜕膜及外周血中NK细胞内Th1/Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4的表达。5) LDH法分别测定蜕膜及外周血中单个核细胞对NK细胞敏感性靶细胞K562的杀伤活性。结果:1)外周血中的NK细胞是以CD56+CD16+为主,蜕膜中的NK细胞是以CD56+CD16-为主。ICP组外周血中的NK细胞含量明显高于对照组外周血中的NK细胞含量（P<0.05）,ICP组蜕膜中NK细胞含量明显高于对照组蜕膜中的NK细胞含量（P<0.05）。ICP组外周血中CD3-CD56+细胞、CD56+CD16-细胞、CD56+CD16+细胞、CD56+NKG2D+细胞含量均显著升高（P<0.05）,而CD56+NKG2A+细胞细胞含量无显著变化（P>0.05）。ICP组蜕膜中CD3-CD56+细胞、CD56+CD16-细胞、CD56+CD16+细胞、CD56+NKG2D+细胞含量均显著升高（P<0.05）,而CD56+NKG2A+细胞含量无显著变化（P>0.05）。2)与对照组相比,ICP组蜕膜NK细胞高表达NKG2受体家族NKG2A和NKG2D,但在两组滋养层中检测到NKG2A的配体HLA-G和HLA-E,而未检测到NKG2D的配体MICA,而且没有差别。3)与对照组相比,ICP患者外周血及蜕膜单个核细胞培养上清中INF-γ含量均显著增高（P<0.05）,而IL-4含量无显著变化（P>0.05）。4)与对照组相比,ICP患者dNK及pNK细胞内Th1/ Th2型细胞因子IFN-γ和IL-4的表达均明显增高（P<0.05）。5)在一定效靶比情况下,ICP组蜕膜及外周血单个核细胞对NK细胞敏感性靶细胞K562的杀伤活性明显高于对照组蜕膜及外周血单个核细胞。结论:ICP组外周血及蜕膜组织中NK细胞在含量、表型、Th1/Th2细胞因子表达及杀伤功能方面均与正常晚孕对照组存在差异,并与滋养层细胞之间有密切联系。异常的免疫应答不仅出现在ICP患者的全身系统,而且突出表现在母胎界面局部。蜕膜NK细胞独特的表型及功能在介导母胎界面免疫耐受中发挥重要作用。

论文目录

• 1. 中英文缩略词表
• 2. 中文摘要
• 3. 英文摘要
• 4. 正文
• 1) 前言
• 2) 材料与方法
• 3) 结果
• 4) 讨论
• 5) 结论
• 6) 参考文献
• 5. 附录
• 6. 致谢
• 7. 综述
• 8. 综述参考文献