新疆雪莲化学成分及指纹图谱研究

论文摘要

新疆雪莲（Saussurea involucrata （Kar.et Kir.））是菊科（Compositae）凤毛菊属植物,是新疆特有的珍奇名贵中草药,收录于《本草纲目拾遗》。具有补肾肾活血,强筋骨,营养神经,调节异常体液等功效,用于风寒湿痹痛、类风湿性关节炎,小腹冷痛,月经不调等的治疗。由于新疆雪莲独特的药用价值和它特殊的生长环境,过度的开发导致资源逐渐减少,目前已被国家列为濒危物种。市场上的雪莲药材来源较广,导致质量良莠不齐。2010年中国药典对新疆雪莲药材的评价采用薄层色谱和高效液相色谱法,以芦丁和绿原酸为其质量评价的指标,容易导致人为添加单一检测成分的掺伪品蒙混过关。本研究旨在新疆雪莲的不同极性部位的药理活性及化学成分研究的基础上建立色谱指纹图谱的评价体系,为新疆雪莲的质量控制提供更多科学依据。本实验对新疆雪莲65%乙醇提取液的乙酸乙酯和正丁醇萃取部位进行了化合物的分离和纯化,得到了13个化合物,并利用各种波谱鉴定手段对得到的化合物进行了鉴定。其中有3个黄酮化合物,还有7个以雪莲内酯-8-β-D-葡萄糖（10）为代表的愈创木烷型倍半萜内酯,此类化合物为新疆雪莲所属植物的特征性成分。本文以HPLC和TLC两种色谱技术对新疆雪莲进行了指纹图谱研究。以乙酸乙酯部位的提取物建立了新疆雪莲的HPLC旨纹图谱,确定了以流动相为水（A）-乙腈（B）,洗脱条件为8%B-100%B（0-75min）和检测波长为200nm作为指纹图谱的色谱条件,共指定了10个色谱峰,并确定了其中的7个：costic acid （1）; 8a-Hydroxy,11βH-11,13-dihydr odehydrocostuslactone （3）; 3α,8α-dihydroxy,11β-11,13-dihydrodehydrocostuslactone （6）; 11β,13-dihydrodeacylcynaropicrin （7）;11βH-11,13-dihydrodehydrocostuslactone 8a-O-β-D-glucopyranoside（10）;11β,13-dihydrodesacylcynaropicrin 8-β-D-glucoside （12）; rutin （13）。对四个产区的新疆雪莲药材和3个批次的雪莲口服液及1个雪莲提取物半成品的指纹图谱进行了分析,结果显示不同产区药材间的差别较大,提取物半成品与原药材相似度较高,口服液中有两个批次的产品的色谱图中含有的主要峰在对应药材和半成品的色谱图中没有反映。样品TLC图在365nm波长下比在可见光下的视觉效果好,不同产区药材间的差别与它们在HPLC图上的表现相似,口服液产品中大部分成分与药材和半成品相比含量较低,但有个别成分表现相反,与HPLC色谱图的表现类似,但三批口服液的TLC图展开情况几乎相同,这与它们在HPLC图中的表现不同。对新疆雪莲四个产区的药材用氯仿萃取得到脂溶性成分,运用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）鉴定了56个化合物,并用面积归一化法确定了各化合物的相对含量。结果发现4个产区的雪莲样品脂溶性成分主要为倍半萜类、不饱和脂肪族类、饱和脂肪族类、甾体类和三萜类化合物。棕榈酸,3,5,6,7,8,8a-六氢-4,8a-二甲基-1-6-（1-甲基乙烯基）-2（1H）萘酮,亚油酸,α-亚麻酸,二十九烷,三十一烷,谷甾醇和α-香树精的含量在4个产区样品中的含量均较高,但各个成分的相对含量存在差别。二十二碳六烯酸甲酯、巴西菊内酯、亚油酸和α-亚麻酸均为首次在该植物脂溶性成分中发现。对新疆雪莲4个产地药材的脂溶性成分成分的抗菌实验选用普通金黄色葡萄球菌和多药耐药金黄色葡萄球菌共6个菌株,用96孔板法测定各样品对菌株的MIC值。但结果发现四个产地药材的脂溶性成分没有明显的抗菌活性。对新疆雪莲四个产区药材脂溶性成分和雪莲65%乙醇提取液及乙酸乙酯、正丁醇萃取部位、萃取后剩余水溶部位进行的抗氧化实验中,四个产区的脂溶性成分样品对DPPH自由基的清除能力略有差别,与相同浓度下的维生素E和维生素C相比,不具有显著的清除DPPH自由基的能力,但其清除能力随着样品浓度的增加而增加。质量浓度为2 mg//mL的样品,对DPPH自由基的清除率已达到25%-45%；本论文首次对雪莲65%乙醇提取液及乙酸乙酯、正丁醇萃取部位、萃取后剩余水溶部位进行抗氧化实验,结果显示乙酸乙酯和正丁醇萃取部位的抗氧化活性高于总提取液和剩余水溶部分的活性,其中乙酸乙酯萃取部位的抗氧化活性最高,质量浓度为0.2 mg//mL的样品,清除率已达到平衡（93%）。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 综述
• 2.1 化学成分及药理活性研究
• 2.2 质量控制研究
• 第三章 新疆雪莲化学成分研究
• 3.1 新疆雪莲65%乙醇提取液化学成分研究
• 3.1.1 仪器、试剂和材料
• 3.1.2 提取分离与纯化
• 3.1.3 化学成分结构鉴定
• 3.2 新疆雪莲脂溶性成分研究
• 3.2.1 材料与仪器
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.3 结果与讨论
• 第四章 新疆雪莲指纹图谱研究
• 4.1 HPLC指纹图谱研究
• 4.1.1 仪器、试剂与样品
• 4.1.2 实验方法
• 4.1.3 实验结果
• 4.2 TLC指纹图谱研究
• 4.2.1 试剂与仪器
• 4.2.2 实验方法
• 4.2.3 结果与讨论
• 4.3 小结
• 第五章 新疆雪莲生物活性研究
• 5.1 实验材料与仪器
• 5.2 实验方法
• 5.3 实验结果
• 5.4 小结
• 参考文献
• 致谢
• 论文发表
• 附录 论文化合物波谱图