人心脏和内皮细胞中mir126的克隆和功能的初步研究

论文摘要

目的:克隆并发现人心血管高表达miRNA,分析其表达谱并寻找其靶基因,探寻其可能参与的心血管生理病理过程。方法:构建人心脏和内皮细胞的miRNA文库,运用Northern Blot和实时荧光定量PCR检测miRNA的表达谱。通过生物信息学以及分子生物学手段预测、分析新发现miRNA的来源和作用的靶基因。运用基因芯片检测过表达新发现miRNA的Hela细胞并高通量分析该miRNA可能调控的基因。结果:克隆到数百个心血管表达的miRNA,首次在人的组织和细胞中克隆到mir-126并证实其高表达于内皮和心肌细胞。发现mir-126来源于egfl7基因的第7个内含子中并能通过宿主mRNA前体的剪切形成。发现VEGF是mir-126的靶基因,并且mir-126在乳腺癌组织中表达下调。此外,mir-126能够下调AKT2基因同时能够激活TNFAIP3和CXCL11的表达。结论:Mir-126是一个心血管系统高表达miRNA并且在调节心肌代谢和血管新生等过程中起重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词
• 详细摘要
• 前言
• 第一部分 人心脏和内皮细胞microRNA 文库的构建和表达谱分析
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 1. 人心脏和内皮细胞microRNA 文库的构建
• 2. Northern Blot 检测miRNA 方法的建立及表达谱分析
• 3. 实时荧光定量 PCR 检测miRNA 方法的建立
• 讨论
• 第二部分 Mir-126 的来源、物种保守性及其形成机制的初步研究
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 1. 不同物种基因组中mir-126 前体和成熟序列的保守性分析
• 2. Mir-126 前体二级结构的预测
• 3. Mir-126 前体在哺乳动物基因组中的定位
• 4. hEgf17（126）-pEGFPc1 重组质粒表达产物的分析
• 5. Mir-126 宿主基因 Egf17 的表达谱检测
• 讨论
• 第三部分 Mir-126 靶基因的寻找和功能的初步研究
• 实验材料
• 实验方法
• 实验结果
• 1.Mir-126 靶基因的生物信息学预测
• 2.VEGF 是mir-126 的靶基因
• 3.Mir-126 在乳腺癌组织中表达下调
• 4. 运用芯片和定量 PCR 技术检测分析mir-126 调控的基因
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 MicroRNA 在心血管发育和疾病中的功能研究进展
• 致谢