肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶与AmpC酶的耐药表型及基因型分析

论文摘要

目的肺炎克雷伯菌是临床感染的常见致病菌之一,近年来由于产酶株的流行蔓延使其耐药性大大增强、二次感染机率大,成为流行病学研究和防治工作中的难题。本课题对临床收集的肺炎克雷伯菌从细菌学分析、抗菌药物敏感性试验以及超广谱β内酰胺酶（extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs）与质粒介导AmpC酶的分子生物学分类等方面进行研究,探讨本地区肺炎克雷伯菌流行病学特性,为临床肺炎克雷伯菌感染的鉴定和治疗提供可靠依据。方法1、临床标本的细菌学分析:本试验收集淄博地区2007年6月-2008年8月临床送检的血液、尿液、痰、胸腹水、分泌物等感染性标本。常规操作进行细菌培养,采用英国SENSITITRE ARIS荧光快速微生物鉴定/药敏分析系统进行鉴定。2、抗菌药物敏感试验:根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K-B法检测肺炎克雷伯菌各菌株对常用抗菌药物的敏感性。3、ESBLs和质粒介导AmpC酶的表型检测:根据药敏结果初筛产ESBLs和AmpC酶菌株,经CLSI/NCCLS纸片确认试验检测ESBLs,三维确认试验检测质粒介导AmpC酶。4、ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型分析:运用聚合酶链反应（PCR）技术,以多组引物扩增产酶株的质粒DNA,通过扩增产物的电泳图谱分析ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型。结果1、临床标本的细菌学分析:本实验共检出淄博地区非重复的肺炎克雷伯菌68株。2、抗菌药物敏感试验:实验结果显示,肺炎克雷伯菌主要对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦和头孢吡肟敏感性较高,而对三代头孢类抗生素高度耐药。3、ESBLs和质粒介导AmpC酶的表型检测:从68株肺炎克雷伯菌中检出产ESBLs阳性株20株、产质粒介导AmpC酶阳性株3株、二者均阳性2株,分别所占比例为29.4%、4.4%和2.9%。4、ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型分析:运用PCR技术可快速精确地分析两种酶的基因型,结果ESBLs主要为TEM型和CTX-M型,AmpC酶以DHA型为主。结论1、临床标本的细菌学分析:应用常规细菌分离培养方法即可获得肺炎克雷伯菌的纯生长,应用荧光快速微生物鉴定/药敏分析系统可实现细菌的快速准确鉴定。2、抗菌药物敏感试验:本实验选用NCCLS推荐的K-B法对肺炎克雷伯菌进行药物敏感性试验,该实验方法成熟、技术完善、并建立了各药物敏感性判定标准,结果准确可靠,能更好地服务于临床。3、ESBLs和质粒介导AmpC酶的表型检测:本实验选用NCCLS推荐的纸片确认试验和三维试验分别检测ESBLs和质粒介导AmpC酶,准确率较高,误差小;缺点是三维试验操作较繁琐,有待于进一步改进优化。4、ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型分析:运用PCR和电泳的方法鉴定ESBLs和质粒介导AmpC酶的基因型,对致病菌区域性流行和耐药机制的研究具有实际意义,有利于进行细菌流行病学监测,有利于指导临床合理用药。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 实验材料
• 1、实验菌株
• 2、主要实验仪器设备
• 3、主要实验试剂
• 4、质控菌株
• 第二章 实验方法
• 1 标本采集
• 2 细菌培养
• 3 基本形态
• 4 药敏试验
• 5 ESBLs与AmpC酶的表型检测
• 6 提取质粒DNA
• 7 PCR扩增
• 8 电泳分析
• 9 结果与统计学处理
• 第三章 实验结果
• 1 细菌培养结果
• 2 ESBLs与AmpC酶的表型检测结果
• 3 药敏结果
• 4 PCR及电泳结果
• 第四章 附图
• 第五章 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 综述
• 在学期间的研究成果及发表的论文
• 致谢