论文摘要
猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）主要引起怀孕母猪的繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状,自1987年首次报道以来,已形成全球性流行并造成了很大的经济损失。该病的病原为PRRSV,随着毒株的毒力变异,新的强毒株不断出现,并能引起免疫过的猪场发病,而且人工致弱的疫苗毒也能返强而引起临床疾病。目前,针对该病尚无有效的治疗措施,因此加强对该病的监测尤为重要。本文分别用原核和真核表达系统对PRRSV核衣壳蛋白基因进行表达,并对目的基因蛋白的表达进行了分析,证明其具有良好的抗原性,为该病的监测和防控奠定一定的基础。一、猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达用RT-PCR扩增出PRRSV YC/2007株核衣壳蛋白（N）基因,首先克隆到pGEM-T easy载体,再克隆到表达载体pGEX-6P–1中谷胱甘肽- S-转移酶（GST）基因的下游,重组质粒转化大肠杆菌BL21,实现了PRRSV核衣壳蛋白基因在原核表达系统中的表达。经SDS–PAGE和Western blot方法对表达产物进行分析,结果表明GST–N融合蛋白的分子量约为39.5kDa,另外还有一大小为30.5 kDa左右的GST-N融合蛋白的降解产物。证明了表达产物的特异性。二、猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因在杆状病毒表达系统中的表达本试验将PRRSV YC/2007株核衣壳蛋白基因克隆到转座载体pFastBac1中,然后将含有PRRSV核衣壳蛋白基因的表达盒转座到穿梭载体Bacmid中。重组质粒转染Sf9细胞,获得了重组杆状病毒reBac-N。重组病毒感染Sf9细胞后,用IFA和Western blot方法对细胞表达产物进行检测,结果表明:构建的重组杆状病毒能够在昆虫细胞中表达PRRSV YC/2007株的核衣壳蛋白。
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