论文摘要
目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对抑制过氧化氢诱导体外培养兔晶状体上皮细胞凋亡的作用,从而探讨EGCG及联合维生素C对晶状体氧化损伤进行药物治疗的可行性。研究方法:采用体外培养正常家兔晶状体,按随机分组原则将家兔晶状体分为以下6组:空白对照组(A);过氧化氢(1mmol/L)处理组(B);过氧化氢和不同浓度EGCG(10mmol/L、20mmol/L)处理组(C1、C2);过氧化氢和不同浓度EGCG(10mmol/L、20mmol/L)联合维生素C(1mmol/L)处理组(D1,D2)。分别于24、48、72小时培养结束后观察各组晶状体的透明度,同等条件下用数码相机拍照并进行灰度分析;可见光分光度法测定晶状体组织的总抗氧化能力(T- AOC)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化;对凋亡细胞予以确认和进行免疫组化染色,检测LECS中凋亡相关基因bcl-2的表达;以及采用脱氧核苷酸末端转移酶缺口标记原位细胞检测法(TUNEL)检测EGCG对过氧化氢诱导的兔晶状体上皮凋亡细胞数量的影响,并进行相关比较及统计学分析。结果:1、透明度观察,各实验点观察不同浓度EGCG处理组及联合用药组的晶状体透明性均低于空白对照组,但高于过氧化氢处理组,差异有显著统计学意义(P<0.05);2、氧化指标的观察,和空白对照组比较,过氧化氢处理组T-AOC,SOD,活性明显降低,MDA含量明显升高,不同浓度EGCG处理组及联合用药组上述指标有不同程度的改善;3、免疫组化观察,过氧化氢组晶状体上皮细胞Bcl-2活化表达显著下调。EGCG可以明显增强晶状体上皮细胞Bcl-2活化表达,且存在一定程度的剂量依赖性。4、TUNEL检测观察,过氧化氢组LECS凋亡率组显著高于空白对照组(p<0.05);过氧化氢组与不同浓度EGCG处理组及联合用药组比较,有显著性差异(p<0.05)。结论:本研究观察,发现EGCG具有抗氧化损伤作用,可抑制过氧化氢氧化损伤体外所诱导兔晶状体上皮细胞凋亡,其作用可能是防止和延缓白内障的发生和发展的细胞学基础。
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