1.桓台县人民医院呼吸内科；2.神经外科3.内分泌科山东淄博256400
摘要：目的：探讨瘦素（OB）对大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖的影响。方法：体外培养大鼠ASMCs，RT-PCR法测ASMCs瘦素受体（OB-R）的表达。不同浓度OB（0、20、40、60、80及100ng/ml）干预培养大鼠ASMCs不同时间（1、12、24、48及72h）后，CCK-8法测增殖情况。结果：20-100ng/mlOB作用ASMCs于1、12、24、48及72h后，各组OD值较对照组显著升高，P<0.05。OB对ASMCs增殖的诱导作用与浓度、时间呈正相关，P<0.01。结论：OB促进体外培养的大鼠ASMCs增殖。
关键词：瘦素；气道平滑肌细胞；增殖
哮喘主要由气道重塑造成，上皮细胞化生、ASMCs增生和肥大。抑制ASMCs增殖可作为治疗哮喘的靶点。本研究观察OB对大鼠ASMCs增殖的影响。
1资料与方法
1.1研究对象170gSD大鼠1只/徐州医学院实验中心；DMEM培养基/Gibico；胎牛血清/四季青；胰蛋白酶/Sigma；OB/Alexis；兔抗大鼠OB-R的抗体/博士德；CCK-8试剂盒/凯基；TRNzol总RNA提取试剂盒、RT-PCR试剂盒/天根。
1.2方法
1.2.1大鼠ASMCs的培养麻醉大鼠，无菌下纵剖大鼠气管，剥离外膜内膜，剪lmm×1mm×1mm块，贴培养瓶底面，加200mL/L胎牛血清的高糖培养基培养、换液、传代，选4-6代细胞。
1.2.2细胞鉴定将消毒玻片置六孔培养板孔内，细胞入孔，加2mL高糖培养基。细胞融合50-60%时取出玻片，固定，100mL/L山羊血清封闭非特异性抗原，抗SMC-α-actin室温孵育2h，荧光标记二抗，4℃孵育细胞过液，封片后在荧光显微镜下检测。
1.2.3OB-R的mRNA测定收集未经OB干预的ASMCs，TRNzol法提取细胞总RNA，紫外分光光度法测RNA浓度。用RT-PCR。
1.2.4ASMCs增殖的CCK-8测定取第5代ASMCs，2.5g/L胰酶消化，计数，细胞活性大于95%。将ASMCs按1×104细胞/孔种于96孔板培养24h，换无血清培养液培养24h，再换10mL/L胎牛血清培养液。细胞随机分6组：对照组及20、40、60、80、100μg/L的OB处理组，每组6复孔，培养1、12、24、48、72h，每孔加10μLCCK-8培养2h，波长450nm测各孔OD值。
1.3统计学方法用SPSS17.0分析数据，计量资料±s，用单因素方差、Pearson分析、q检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
20-100ng/mlOB作用ASMCs于1、12、24、48及72h后，各组OD值较对照组显著升高，P<0.05。OB对ASMCs增殖的诱导作用与浓度、时间呈正相关，P<0.01，表1。
3讨论
ASMCs异常改变是气道重塑的关键环节。重度哮喘患者气道平滑肌增殖50-80%。Taylor[1]等对哮喘患者据BMI分组，发现肥胖与哮喘严重性呈正相关。哮喘与肥胖患者数量同步上升，肥胖患者OB水平增高[2]。Bohlen等发现增加OB浓度50或100ng/ml可显著下调短型OB-R亚型，抑制血管平滑肌细胞增殖。Huang[3]等发现OB诱导大鼠动脉平滑肌细胞增殖致动脉内膜增厚和血管重塑。本研究发现，随OB浓度增加、时间延长，ASMCs增殖数增多，OB促进体外培养的大鼠ASMCs增殖。抑制ASMCs增殖可作为治疗肥胖相关哮喘的新目标。
参考文献：
[1]TaylorB，ManninoD，BrownC，etal.Bodymassindexandasthmaseverityinthenationalasthmasurvey.Thorax，2008，63：14-20.
[2]SaraivaSA，SilvaAL，XistoDG，etal.Impactofobesityonairwayandlungparenchymaremodelinginexperimentalchronicallergicasthma.RespirPhysiolNeurobiol，2011，28：208-229.
[3]HuangF，XiongX，WangH，etal.Leptin-inducedvascularsmoothmusclecellproliferationviaregulatingcellcycle，activatingERK1/2andNF-kB.ActaBiochimBiophysSin，2010，42：325-331.