论文摘要
目的 构建淋球菌PI基因T-A克隆重组载体,对PI基因进行序列分析,以寻找PI基因抗原稳定性位点;构建PI基因表达重组子,诱导表达及纯化重组PI蛋白,研究重组蛋白的功能,为后续PI蛋白免疫学特性的研究、抗体制备,及淋病疫苗研制奠定基础。 方法 本文分为四个部分,分述如下: 第一部分 淋球菌标准株PI基因克隆重组子的构建:提取淋球菌标准菌株29400和29403基因组DNA,PCR扩增淋球菌PI基因,产物经纯化后,在序列两端加A,并与pBS-T线性载体连接,连接产物转化DH5α感受态细胞,经氨卞青霉素抗性筛选和蓝白斑筛选,挑取白色菌落用于质粒提取,用FcoR I和Xho I双酶切所得质粒,初步鉴定阳性克隆。 第二部分 PI基因序列分析:测定1中所得阳性重组子的PI基因序列,用blastn软件将所得序列与GenBank数据库中序列进行比较,寻找相似序列;用clustalW软件对所得2条标准株PI基因及本实验室之前所得4条临床分离株PI基因序列进行多序列同源性比较,分析标准株与临床株序列间差异;对6条序列的氨基酸序列进行多序列同源性比较,将本研究结果与他人的研究进行比较,预测PI蛋白的二级结构,并用蛋白质结构预测软件预测PI蛋白的三维构型。 第三部分 PI基因表达重组子的构建:将1中所得pBS-PI克隆重组子经双酶切和胶回收得到有粘性末端的PI片段,同时用相同的限制性内切酶双酶切、去磷酸化及胶回收表达载体pET30b（+）,将所得插入片段PI基因与载体进行连接,并转化DH5α感受态细胞,构建表达重组子的克隆重组菌;将所得表达重组质粒转
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