活血化瘀汤对大鼠骨折愈合中一氧化氮合酶活性和诱导型基因表达的影响

论文摘要

目的:在酶活性（enzymatic activity）、信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）、蛋白（protein）三个层次探讨活血化瘀汤对大鼠血清一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）酶活性和骨折端诱导型一氧化氮合酶（inducible NOS,iNOS）基因表达的影响,阐明活血化瘀汤促进骨折愈合的分子生物学可能机制。 方法:本课题采用体重320土15g雄性SD大鼠80只,建立左胫骨中段闭合折骨经皮髓内克氏针固定的标准骨折模型（成功造模76只）;双盲随机分组,中药组和对照组各半,分别以活血化瘀汤、蒸馏水灌胃。应用化学比色法于骨折前1d,骨折后1d、4d、7d、14d、21d检测骨折愈合过程中血清NOS、iNOS、原生型一氧化氮合酶（constitutive NOS,cNOS）酶活性的变化;通过逆转录聚合酶链反应（Reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR）、蛋白印迹（Western blottings）法于骨折后4d、7d、14d、21d分别检测骨痂中iNOS的mRNA、蛋白的表达。 结果:1.对照组血清总NOS、cNOS、iNOS酶活性分别于骨折后14d、4d、14d达峰值;中药组NOS、cNOS酶活性峰值均在骨折后14d,iNOS酶活性则持续升高。中药组与对照组相比,骨折后7d、14d、21d总NOS酶活性,骨折后14dcNOS酶活性增高非常显著（P<0.01）;骨折后4dNOS酶活性、7dcNOS酶活性,骨折后4d、2idiNOS酶活性增高显著（P<0.05）。2.骨折后骨痂样本7d、14d、21d可见iNOS的mRNA与蛋白的表达,14d达到峰值;中药组与对照组比较,骨折后7d、14d iNOSmRNA增强非常显著（P<0.01）,14d iNOS蛋白表达增强显著。 结论:1.大鼠胫骨中段闭合折骨髓内克氏针固定骨折模型稳定,可操作性强,重复性好。2.骨折后血清NOS酶活性升高,cNOS与iNOS变化不同,骨折后4d酶活性最高而iNOS酶活性最低,骨折后14dcNOS酶活性最低而iNOS酶活性最高。3.活血化瘀汤增强血清NOS酶活性,主要增强骨折后4d、21diNOS酶活性,7d、14dcNOS酶活性,而促进骨折愈合。4.活血化瘀汤通过早期增强骨痂iNOS的mRNA及蛋白的表达增强iNOS酶活性。

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