胞浆型磷脂酶A2活化表达与高血压心脏重构关系的研究

论文摘要

目的探讨活化的胞浆型PLA2与高血压心脏重构的关系,本研究利用电镜观察4、8、16、24周龄SHR左心室心肌细胞超微结构变化,围绕ERK1/2的调节通路,免疫组化法检测不同周龄SHR左心室壁（内纵层、中环层、外斜层）、室间隔ERK1/2下游调节因子cPLA2的表达,Western-blotting法检测p-cPLA2,p-MEK,p-ERK1/2的表达,从细胞信号通路转导方面分析高血压状态下cPLA2是否参与了高血压心脏重构,进一步明确ERK1/2参与高血压心脏重构作用的可能调节机制。方法动物分组:①原发性高血压（Spontaneously Hypertensive Rats,SHR）组:4周龄组（SHR4）,8周龄组（SHR8）,16周龄组（SHR16）,24周龄组（SHR24）,每组各6只;②WKY（Wistar-Kyoto）大鼠作为对照组:4周龄组（WKY4）,8周龄组（WKY8）,16周龄组（WKY16）,24周龄组（WKY24）,每组各6只。HE染色,光镜测微尺测量4、8、16、24周龄SHR心脏重构改变,观察组织学改变,利用透射电镜观察各年龄段SHR心肌超微结构变化,免疫组化法检测不同周龄SHR大鼠左心室壁（内纵层、中环层、外斜层）、室间隔p-cPLA2的表达,Western-blotting法检测cPLA2,p-MEK,p-ERK1/2的表达。结果1、血压变化:WKY血压保持在正常水平（107.65±6.55mmHg）。SHR组从8周龄开始血压升高,SHR8、SHR16、SHR24组动脉收缩压均明显高于同周龄WKY组（P<0.05）;2、心脏/体重比值改变:随着大鼠周龄的增加SHR和WKY大鼠的心脏/体重比值逐渐增加,16、24周龄SHR的心脏/体重比值明显高于4周龄SHR（P<0.05）,与同周龄WKY大鼠比值比较, 16、24周龄SHR的心脏/体重比值明显高于WKY大鼠（P<0.05）;心脏相对腔室厚度变化:SHR组相对左心室壁厚度随周龄增加,逐渐增加,以左心室肌内层和中层厚度增加明显,16、24周SHR相对左心室壁厚度明显高于16、24周WKY大鼠（P<0.05）。16、24周龄SHR组相对左心室壁厚度明显高于SHR4组（P<0.05）;组织学改变:心肌组织HE切片观察,正常血压对照组WKY组大鼠心肌排列整齐,基本结构清晰。与之相对应SHR组心脏基本结构存在,心肌排列整体比较整齐,个别区域心肌排列紊乱,心肌细胞体积普遍增大,心肌细胞长度增加,偶见双核。SHR组心肌间质血管壁较WKY组明显增厚。3、心肌超微结构变化: WKY组心肌肌膜光滑平坦,线粒体、润盘无明显病理表现,间质血管正常。与之相比较,8、16周龄SHR心肌细胞内可见膨胀增大的线粒体,基质内嵴结构模糊,部分线粒体呈羽毛状溶解坏死。肌浆网池扩张不平坦呈泡状突出,少部分线粒体溶解,到SHR24上述心肌细胞变化更为明显。SHR24润盘明显减少,部分润盘局部缝隙有扩张,可见异常球形膨大,润盘走行紊乱屈曲;SHR心肌间毛细血管内皮细胞增生明显,血管壁明显增厚,血管腔狭窄变形;心肌间质及血管旁可见增生的成纤维细胞,胶原增多。4、磷酸化cPLA2在心脏各部位的检测结果:磷酸化cPLA2免疫组组织化学阳性表现为心肌细胞细胞浆内有棕黄色或淡黄色颗粒沉着,随实验大鼠的周龄与心脏部位不同,其表达范围也不同,大鼠心脏左心室壁和室间隔,磷酸化cPLA2在SHR的表达均随周龄的增加逐渐增加,心室壁各层表达情况:在左心室壁内层SHR16、SHR24的表达阳性率分别为76.38%、78.56%,明显高于WKY16、WKY24阳性率51.52%、53.74%;在左心室壁中层SHR16、SHR24的表达阳性率分别为75.03%、82.03%,明显高于WKY16、WKY24大鼠阳性率46.51%、55.67%;在左心室壁外层SHR24的表达阳性率78.53%,明显高于WKY24大鼠阳性率56.74%;磷酸化cPLA2在室间隔与在左心室壁上的表达规律不同: SHR24组大鼠的室间隔左心室面磷酸化cPLA2表达阳性率50.12%,明显高于WKY24组表达阳性率29.87%;室间隔右心室面磷酸化cPLA2表达各组无显著性差异;磷酸化cPLA2在SHR4的左心室壁内层和中层的表达明显高于室间隔左、右心室面的表达（P<0.05）。在SHR24大鼠左心室壁的内、中、外三层的表达阳性率明显高于室间隔右心室面的阳性率（P<0.05）,室间隔左心室面的表达与右心室面的表达无显著性差异。5、Western blot检测也证明了随周龄增加SHR心脏中磷酸化cPLA2蛋白含量逐渐增高这一结果。6、大鼠心脏磷酸化MEK检测结果:SHR24心脏中磷酸化MEK1/2蛋白含量高于SHR8,SHR24心脏中磷酸化MEK1/2蛋白含量较WKY24组大鼠高。7、大鼠心脏磷酸化ERK检测结果:SHR24心脏中磷酸化ERK1/2蛋白含量高于SHR8,SHR24心脏中磷酸化ERK1/2蛋白含量较WKY24组大鼠高。结论（1）SHR高血压大鼠心脏重构以左心室肥厚为主。（2）心肌细胞增殖/凋亡失衡,心肌间血管重构和心肌纤维化共同参与了SHR心脏重构。（3）MEK1/2-ERK1/2 -cPlA2通路参与了SHR心脏重构,心肌细胞增殖/凋亡失衡。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢
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